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大鼠胸主动脉平滑肌细胞内PARP-1在VDR转录调节中作用的研究

作　者: 张莹
导　师: 黄恺
学　校: 华中科技大学
专　业: 内科学
关键词: 1型多聚ADP核糖聚合酶维生素D受体核受体蛋白相互作用血管平滑肌细胞靶基因转录调节
分类号: R541
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:探讨大鼠胸主动脉平滑肌细胞(VSMCs)内1型多聚ADP核糖聚合酶(PARP-1)与维生素D受体(VDR)相互作用及作用方式,以及PARP-1活性对VDR靶基因(Target genes)转录的影响,进而分析PARP-1活性抑制剂对大血管VSMCs增殖表型变化的影响。方法:用组织贴块法体外培养大鼠胸主动脉VSMCs作为细胞基础模型,利用蛋白免疫印迹法(WB)检测细胞核内PARP-1及VDR表达水平;用核提取蛋白的免疫共沉淀(co-IP),核提取蛋白及重组VDR蛋白的体外蛋白-蛋白相互作用试验(Far-WB)和多聚ADP核糖化试验探讨PARP-1与VDR的相互作用方式(蛋白之间直接结合/PAPR-1对VDR进行多聚ADP核糖化修饰);分别给予VDR激动剂1α,25-二羟维生素D3[1α,25(OH)2D3]及不同剂量PARP-1活性抑制剂3AB或PJ-34处理VSMCs,利用聚合酶链式反应(PCR)检测PAPR-1活性受抑制对VDR靶基因转录水平的影响。结果:培养出大鼠胸主动脉VSMCs并能传代至15代作为研究对象。经75nM 1α,25(OH)2D3处理24h的VSMCs核提取物中VDR不能与PARP-1或多聚ADP核糖修饰的PARP-1结合,亦不能被PARP-1多聚ADP核糖化修饰;经同样处理的VSMCs核提取物中的VDR不能与重组PARP-1或多聚ADP核糖修饰的重组PARP-1结合,亦不能被重组PARP-1多聚ADP核糖化;重组VDR不能与重组PARP-1或多聚ADP核糖修饰的重组PARP-1结合,亦不能被重组PARP-1多聚ADP核糖化。VDR靶基因Cyp24a1, Vegfa, Hgf的转录水平与PARP-1活性抑制剂3AB或PJ-34之间没有明显的剂量相关性,但给予活性抑制剂处理组的VSMCs中Vegfa和Hgf的转录水平比单独给予1α,25(OH)2D3处理组更高(P<0.05)。结论:在经75nM 1α,25-二羟维生素D3处理的培养的大鼠胸主动脉VSMCs中,VDR对靶基因的转录调控不依赖于与PARP-1的直接作用或多聚ADP核糖化。抑制PARP-1活性引起的VDR靶基因Cyp24a1, Vegfa, Hgf的变化很可能由细胞核内能与VDR及PARP-1直接作用的其他转录因子调节。PARP-1活性抑制剂3AB或PJ-34或可促使VSMCs向增殖表型改变。

全文目录

英文缩略表及中文对照  5-6
摘要  6-8
ABSTRACT  8-10
前言  10-14
1 材料  14-24
2 方法  24-36
3 结果  36-46
4 讨论  46-52
5 结论  52-53
附录本课题资助基金项目  53-54
参考文献  54-62
致谢  62

大鼠胸主动脉平滑肌细胞内PARP-1在VDR转录调节中作用的研究

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