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抗HIV融合多肽CP32M的合成工艺研究

作　者: 付超
导　师: 戴秋云
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 药物化学
关键词: 抗HIV融合多肽 CP32M 多肽合成 固液相结合策略
分类号: TQ463
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


HIV融合抑制剂是继逆转录酶和蛋白酶抑制剂之后的第三类抗艾滋病药物。自第一个融合抑制剂Fuzeon上市以来,该类抑制剂已成为抗HIV药物的研究热点。由本实验室研发的HIV融合抑制剂CP32M(Ac-VEWNEMTWMEW EREIENYTKLIYKILEESQEQ-NH2)对HIV-1不同亚型具有很强抑制活性,并对Fuzeon、C34和T-1249产生耐药性的HIV-1病毒高度有效。CP32M含有32个氨基酸残基,逐步固相合成方法很难得到主要产物。本课题采用固液相结合策略对其进行了规模合成,探索了片段划分、树脂选择、温和裂解条件、片段缩合、纯化等合成条件。根据一般片段划分的原则,结合CP32M肽链特点并参考相关多肽(T-20等)的合成方法,对两片段法和三片段法进行了研究。通过比较片段的合成产率、纯度及片段液相缩合的效率,获得了适合CP32M规模合成的三个优选片段,即片段a ( Ac-1-9-OH )、片段b(Fmoc-10-21-OH)、片段c(H-22-32-NH2)。三个肽片段-树脂按照逐步多肽固相偶联方法合成,经温和裂解得到全保护肽片段,b、c片段进行液相缩合后脱除Fmoc保护基团得到中间体肽片段,然后该中间片段再与片段a进行液相缩合得到侧链保护的目标肽,脱除侧链保护基团得到CP32M粗品。用该方法规模合成了三批CP32M (10mmol、15mmol、15mmol),总合成收率达到19.2%。为了提高N端片段的合成产率,将片段再进行了优化,获得片段划分方式五(片段Ac-1-6-OH、片段Fmoc-7-21-OH、片段H-22-32-NH2)。采用上述相似方法合成了20mmol各片段,片段Ac-1-6-OH合成产率达到75.9%,较片段Ac-1-9-OH产率(39%)有很大提高,片段Fmoc-7-21-OH产率为56%。由于CP32M含有9个带负电荷的谷氨酸,采用固液相结合方法合成的粗品杂质主要为较小片段,与目标肽的电荷差异较大,因此我们尝试离子交换色谱对粗品进行初步纯化。通过探索弱阴离子交换色谱(DEAE柱)、强阴离子交换色谱(Q柱)纯化条件,最终确定用DEAE弱阴离子交换色谱进行规模纯化,然后采用C18-HPLC纯化精制。结果表明,CP32M经DEAE弱阴离子纯化后纯度可达到80%,第二步C18 -HPLC规模纯化后纯度大于98%。上述CP32M的规模制备研究,为其后续的质量标准及药代动力学研究奠定基础。

全文目录


目录  4-6
缩略词表  6-7
摘要  7-8
Abstract  8-10
第一章 前言  10-24
  1.1 HIV 病毒的进入机制  10-12
  1.2 HIV 融合抑制剂研究进展  12-19
    1.2.1 多肽类融合抑制剂  12-17
    1.2.2 小分子融合抑制剂  17-19
  1.3 多肽规模合成技术研究进展  19-23
    1.3.1 短肽的规模合成  19-20
    1.3.2 长肽的规模合成  20-23
  1.4 本课题设计思路与技术路线  23-24
第二章 CP32M 片段合成及优化  24-36
  2.1 实验材料和方法  24-26
    2.1.1 材料与设备  24
    2.1.2 实验方法  24-26
  2.2 结果与讨论  26-34
    2.2.1 片段划分方式一  26-27
    2.2.2 片段划分方式二  27-28
    2.2.3 片段划分方式三  28-30
    2.2.4 片段划分方式四  30-32
    2.2.5 片段划分方式五  32-34
  2.3 小结  34-36
第三章 CP32M 规模合成  36-52
  3.1 材料和方法  37-41
    3.1.1 材料及设备  37
    3.1.2 片段划分方式四中的各片段合成、液相缩合及保护基脱除  37-39
    3.1.3 片段划分方式五中的各片段合成、液相缩合及保护基脱除  39-41
  3.2 结果  41-43
    3.2.1 片段划分方式四中三个带侧链保护基肽片段的合成  41-42
    3.2.2 片段液相缩合合成CP32M  42-43
    3.2.3 片段划分方式五中三个带侧链保护基肽片段的合成  43
  3.3 讨论  43-50
    3.3.1 片段的合成  43-44
    3.3.2 片段的缩合  44
    3.3.3 片段及终产物的构象问题  44-50
  3.4 小结  50-52
第四章 CP32M 纯化工艺  52-60
  4.1 材料与方法  52-54
    4.1.1 材料  52
    4.1.2 实验方法  52-54
  4.2 结果与讨论  54-58
    4.2.1 阴离子交换色谱纯化  54-56
    4.2.2 CP32M C18 -HPLC 纯化  56-58
  4.3 小结  58-60
结论  60-62
致谢  62-64
参考文献  64-70
附图  70-74
硕士期间发表文章  74-76
个人简历  76

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中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 制药化学工业 > 有机化合物药物的生产
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