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鸡传染性法式囊病毒VP2蛋白B细胞抗原表位的研究

作　者: 乔宏兴
导　师: 张改平；王川庆
学　校: 河南农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 鸡传染性法氏囊病病毒中和性抗体 B细胞抗原表位多肽合成
分类号: S852.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

鸡传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease, IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡的一种高度接触性传染病。病毒在法氏囊的B淋巴细胞中迅速繁殖,损伤法氏囊的B淋巴细胞,引起严重的免疫抑制,从而导致疫苗免疫失败和继发感染的发生,对养鸡业造成严重的经济损失。IBDV属于双RNA病毒科的成员,病毒基因组由A,B两个片段的双股RNA组成。其中,基因组B片段编码病毒蛋白VP1,它是一种RNA依赖性的RNA聚合酶;基因组A片段包含2个部分重叠的开放阅读框架(ORF),小ORF编码分子量为17kDa的非结构蛋白VP5;大ORF编码一种分子量约110kDa的前体多聚蛋白,该蛋白在翻译后进一步加工形成VP2、VP3利VP4,形成IBDV的结构蛋白,参与病毒核衣壳的形成,携带病毒主要中和性B细胞抗原表位,诱导中和性抗体的产生。 B细胞抗原表位又称抗原决定簇,是抗原分子上能够被抗体分子识别的部位,在蛋白质抗原中一股由几个直接相邻或构象上相邻的氨基酸组成,决定着机体产生抗体的特异性,是诱导体液免疫的基本单位。对以体液免疫反应为主的IBDV来说,鉴定其B细胞抗原表位便是揭示IBD体液免疫的本质。本项研究应用基因工程技术构建了VP2基因原核表达载体pETVP2,并在大肠杆菌中诱导表达了鸡IBDV主要结构蛋白VP2。表达蛋白能够与鸡IBDV抗血清和单抗发生特异性反应,应用该表达蛋白鉴定出11株单克隆抗体识别VP2蛋白。在应用生物信息学原理分析鸡IBDV VP2蛋白结构特性的基础上,合成了VP2 16-mer重叠多肽51条,VP2 12-mer重叠多肽64条,合成多肽与载体蛋白BSA偶联后,经peptide-ELISA利Dot-ELISA检测其与鸡IBDV单克隆抗体和多抗的反应性。结果显示,VP2中含有5个中和性单克隆抗体识别的线性表位:EP1:37TLRSETSTYNLTV49;EP2:76SNGNYKF82;EP3:201DRPRVYTITAADDYQFS217;EP4:326SWSARGSLAVTI337;EP5:403SERDRLGIKTVW414和6个多抗反应位点:ES1:91NLPASYNYCRLVSRSLTV108;ES2:331GSLAVTIHGGNYPGALRPVTLV352;ES3:371FELIPNPELAKNLVTEYG388;ES4:433NSPLKIAGAFGFK445;ES5:449RAIRRIAVPVVS460;ES6:495ASGKARAASGRIRQLTLA512。VP2单克隆抗体识别的抗原表位多肽同时也能够与鸡IBDV多抗反应。通过重叠多肽合成技术和单克隆抗体抑制实验证明单克隆抗体YNW17识别VP2表位的氨基酸序列为:197CDSSDRPRVYTIT209;单克隆抗体YNW29识别表位的序列为:329ARGSLAVTI337。进一步精确定位了表位EP3和EP4的序列范围。通过本项研究,详细地绘制了鸡IBDV VP2蛋白的抗原表位图谱,对揭示IBDV体液免疫产生的本质具有重要意义,同时为设计IBD新型表位疫苗奠定了基础。

全文目录

摘要  6-7
文献综述  7-20
  一鸡传染性法氏囊病研究进展  7-12
    1. IBD基因组及病毒结构  7-9
    2. IBDV的毒力及其标志  9-10
    3. VP2抗原结构分布与变异  10-11
    4. IBDV疫苗与免疫  11-12
  二 B细胞抗原表位研究进展  12-20
    1. 抗原表位概述  12-13
    2. 蛋白质结构与B细胞抗原表位  13-14
    3. B细胞抗原表位研究方法  14-19
    4. 小结  19-20
引言  20-21
第一部分鸡IBDV VP2基因克隆和原核表达  21-35
  1. 材料和方法  21-27
  2. 结果  27-29
  3. 讨论  29-35
第二部分应用重叠多肽扫描技术鉴定鸡传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2 B细胞抗原表位  35-54
  1. 材料和方法  35-38
  2. 结果  38-47
  3. 讨论  47-54
结论  54-55
参考文献  55-62
英文摘要  62-63

鸡传染性法式囊病毒VP2蛋白B细胞抗原表位的研究

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