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1.海南捕鸟蛛毒素-Ⅳ突变体的固相合成和生理活性分析　2.大鼠背根神经节细胞质膜蛋白质组学研究

作　者: 徐侠
导　师: 王贤纯；梁宋平
学　校: 湖南师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 海南捕鸟蛛毒素-IV 固相多肽合成 突变体 结构与功能
分类号: Q51
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要


第一部分 海南捕鸟蛛毒素-Ⅳ突变体的固相合成和生理活性分析 海南捕鸟蛛毒素-Ⅳ（Hainantoxin-Ⅳ,简称HNTX-Ⅳ）是从我国海南捕鸟蛛（Selenocosmia hainana）粗毒中分离出的一种TTX-敏感型的钠离子通道阻断剂,由35个氨基酸残基组成,含3对二硫键。 为了研究HNTX-Ⅳ结构与功能的关系,用芴甲氧羰基（Fomc）固相多肽合成方法合成了用丙氨酸（Ala）替代HNTX-Ⅳ第12位丝氨酸（Ser12）的突变体S12A-HNTX-Ⅳ和替代第29位精氨酸（Arg29）的突变体R29A-HNTX-Ⅳ。HPLC纯化的突变体经谷胱甘肽法氧化复性,结果证明,5 mmol/L GSH、0.5 mmol/L GSSG、0.1 mmol/L Tris、0.1mmol/L NaCl,pH7.4是氧化复性的最佳反应条件。复性的多肽经MALDI-TOF质谱鉴定,S12A-HNTX-Ⅳ和R29A-HNTX-Ⅳ的分子量（MH+）分别为3973.95Da和3904.13Da,比线性分子（3978.71Da和3909.29Da）少6个质子,说明6个半胱氨酸形成了3对二硫键。 用一维核磁共振波谱法分析突变体的空间结构的变化。S12A-HNTX-Ⅳ和天然HNTX-Ⅳ（nHNTX-Ⅳ）的1D1H-NMR谱图的酰胺质子区域非常相似,说明它们具有相似的分子折叠方式,Ser12被Ala替换后没有引起分子空间结构的明显变化;然而,R29A-HNTX-Ⅳ分子中有些氨基酸残基酰胺质子的化学位移值发生了一定的变化,但毒素分子的整体空间结构并没有发生明显的差异。 用膜片钳电生理方法分析了突变体的生物学活性。结果表明,S12A-HNTX-Ⅳ对钠电流的阻断作用(IC50=58.3 nmol/L)与天然HNTX-Ⅳ分子的(IC50=44.6nmol/L)基本相当,而R29A-HNTX-Ⅳ的活性(IC50=6.93 μmol/L)则比天然HNTX-Ⅳ活性下降了两个数量级,活性下降了155倍。 本研究说明Ser12与HNTX-Ⅳ的生物学活性无关或关系不大,而

全文目录


缩写表(中英文对照)  3-5
摘要  5-12
第一部分 海南捕鸟蛛毒素-Ⅳ突变体的固相合成和生理分析  12-44
  第一章 前言  13-25
    1.多肽毒素突变体的构建  13-20
    2.神经毒素生物学活性的研究  20-23
    3.本文的研究意义和思路  23-25
  第二章 海南捕鸟蛛毒素-Ⅳ突变体的固相合成和生理活性分析  25-39
    1.材料与仪器  25-26
    2.实验方法  26-29
    3.结果和讨论  29-39
  参考文献  39-44
第二部分 大鼠背根神经节细胞质膜蛋白质组学研究  44-112
  第一章 前言  45-64
    1.蛋白质组学概述  45-57
    2.细胞质膜蛋白质组学研究  57-62
    3.本文研究的背景和意义  62-64
  第二章 大鼠背根神经节(DRG)细胞膜蛋白质组学研究  64-100
    第一节 DRG质膜和膜蛋白的提取  64-75
    第二节 膜蛋白质的分离和鉴定  75-98
    第三节 进一步研究设想  98-100
  参考文献  100-112
附录  112-113
致谢  113-114
原创性声明  114

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中图分类: > 生物科学 > 生物化学 > 蛋白质
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