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缺氧性肺动脉高压发病机理的细胞、分子机制探讨
作 者: 姚香兰
导 师: 薛全福
学 校: 中国协和医科大学
专 业: 病理生理学
关键词: 肾上腺素能受体 大鼠肺组织 平均肺动脉压 受体激动剂 常压缺氧 肺血管收缩 血管平滑肌细胞 肺血管重建 生物学实验 缺氧性
分类号: R543
类 型: 博士论文
年 份: 1994年
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内容摘要
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肺动脉高压是肺循环障碍和慢性肺疾病发展为肺心病的必经阶段。在肺心病发病中占重要地位。缺氧引起肺动脉收缩和肺血管重建(肺动脉壁平滑肌细胞增殖,动脉管壁增厚,管腔狭窄,肺内小动脉肌化)是肺动脉高压发生、发展的关键环节。在缺氧性肺血管收缩机理方面以往的研究重视体内神经、体液的变化,对血管壁本身反应性变化及其发生机理的研究较少,近年来才引起注意。本室以往的工作已表明缺氧性肺动脉高压大鼠肺组织及肺血管上α1受体数目增多,而β受体数目先增加后减少,其中尤以β2受体减少为主,换言之,或也即在受体水平上显示,缺氧使肺血管收缩占优势,在肺动脉高压的发生发展中占有一定地位,而β2激动剂及α1阻断剂对缺氧性肺动脉高压均有抑制作用。在此基础上,本室应用β2AR特异引物及RT—PCR方法测定发现缺氧4周肺动脉高压大鼠肺组织β2AR mRNA水平降低。本研究在此基础上第一部分在整体和器官水平上进一步研究缺氧后肺组织及肺血管α1及β2肾上腺素能受体mRNA水平的改变,以探讨缺氧性肺动脉高压形成的分子机制。第二部分在细胞水平研究α1及β2AR及其mRNA表达的变化及与肺动脉平滑肌细胞增殖的关系及增殖的机制。 Ⅰ.第一部分实验观察了常压缺氧后不同时间,大鼠平均肺动脉压,平均右心室压及右心室重量的变化,同时从形态学上观察缺氧后大鼠肺动脉壁的变化,并提取缺氧大鼠肺组织、肺动脉总RNA,从分子水平观察α1ARmRNA和β2ARmRNA的表达变化。近
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全文目录
英文缩略词 5-6 中文摘要 6-12 英文摘要 12-18 前言 18-22 材料与方法 22-43 一.材料 22-25 主要仪器和设备 22-23 试剂 23-25 二.实验方法 25-43 实验用液 25-43 (一) 整体动物实验 26-27 1.动物模型 26-27 2.肺组织形态学观察 27 (二) 离体细胞实验 27-30 1.贴块法培养PASMCs 27-28 2.培养的PASMCs鉴定 28 3.培养PASMCs缺氧模型 28-29 4.[~3H]TdR参入检测PASMCs DNA合成:缺氧及应用受体激动剂,抑制剂后的变化 29 5.培养PASMCs缺氧后c-fos,c-myc表达的测定 29 6.培养PASMCs胞内Ca~(2+)浓度的测定 29-30 (三) 分子生物学实验 30-41 1.总RNA提取 30-33 2.cDNA探针制备 33-39 3.肺组织、肺动脉膜印迹杂交 39-40 4.培养的PASMCs点印迹杂交和膜印迹杂交 40-41 5.从尼龙膜上除去放射性标记的cDNA探针,进行GAPDH核酸分子杂交 41 (四) 统计学处理 41-43 实验结果 43-54 (一) 整体及分子生物学实验 43-47 1.缺氧大鼠Pap,Rvp,R/L+S,R/BW的变化 43-44 2.缺氧大鼠肺动脉的形态学变化 44 3.组织总RNA的鉴定 44-45 4.质粒DNA限制性内切酶酶切分析 45 5.缺氧大鼠肺组织、肺动脉α_1AR mRNA、β_2AR mRNA水平的变化 45-47 (二) 细胞及分子生物学实验 47-54 1.培养的PASMCs鉴定结果 47 2.缺氧后PASMCs DNA合成的变化及α_1AR、β_2AR与PASMCs增殖的关系 47-49 3.缺氧后PASMCs胞浆游离Ca~(2+)浓度变化 49-50 4.细胞总RNA的鉴定 50 5.缺氧PASMCs的c-fos、c-myc mRNA水平变化 50 6.缺氧PASMCs的α_1AR mRNA和β_2AR mRNA水平的变化 50-53 7.缺氧后肺组织、肺动脉及PASMCs GAPDH mRNA水平的变化 53-54 讨论 54-62 小结 62-64 附图 64-85 参考文献 85-95 文献综述 95-134 参考文献 119-134 致谢 134
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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 心脏、血管(循环系)疾病 > 血管疾病
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