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阿勒泰绵羊脂肪及肌肉组织中肾上腺素能受体mRNA水平的发育性变化规律研究

作　者: 韩冰
导　师: 陈勇
学　校: 新疆农业大学
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: 绵羊肾上腺素能受体 mRNA表达水平实时荧光定量PCR
分类号: S826.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

本研究选取13只15日龄体况相近的纯种阿勒泰大尾羊,进行圈养,采取人工代乳的方法至绵羊30日龄后,在不同生长阶段饲喂不同营养水平的日粮。分别在绵羊30、60、90、120、150、180日龄进行空腹左侧颈静脉采血,分离血清用于血液生理生化指标测定；对尾脂的发育水平(尾长、尾宽、尾高)进行测量记录；对尾部脂肪和后腿肱二头肌肌肉进行采样,约0.5g,经过RNA的提取、逆转录后进行cDNA实时荧光定量,检测肾上腺素能受体基因的表达水平,并将其与尾脂发育水平进行相关性分析。血清生化指标结果表明：阿勒泰绵羊的在30、60、90、120、150、180日龄时,各阶段血液生化指标存在显著性差异。总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白均在30日龄时含量最高,31-90日龄间其含量随日龄增加而逐渐减少,91-120日龄又有上升趋势,121-180日龄含量逐渐减少；甘油三酯和尿素氮均在30日龄时含量最低,31-90日龄间逐渐升高,并在60-90日龄时含量达到最高,91-180日龄间略有起伏,但总体呈下降趋势。谷草转氨酶、乳酸脱氢酶和谷丙转氨酶均在0-30日龄时含量最低,谷草转氨酶在31-60日龄时含量达到最高；乳酸脱氢酶含量在90-120日龄时达到最高；谷丙转氨酶的含量在120-150日龄时含量达到最高,此后保持相对稳定。尾脂测量数据显示：尾高的发育变化规律与尾长相似,增幅分别介于0.65-1.99cm/30d和0.73-1.97cm/30d之间。30-60日龄阶段二者增幅最大,在60-120日龄阶段,尾高和尾长的增长速度都随日龄的增加逐渐降低；120-150日龄时,义有所增加,此后增幅呈下降趋势。尾宽的增幅较尾长、尾高大,为0.78-2.81cm/30d。在120日龄前,尾宽的增长速度随日龄的增加逐渐降低；120-150日龄时,增幅迅速增加,并达到最大,为2.81cm/30d,此后增幅又呈下降趋势。基因表达定量结果表明：绵羊肌肉组织中的β1-AR、β2-AR、B3-AR和a2A-AR基因在绵羊30日龄时表达水平都比较低,但30日龄后迅速升高,除a2A-AR基因外,β1-AR、β2-AR、β3-AR基因均随绵羊日龄增加表达水平升高。在60-150日龄时检测各基因丰度的关系为a2A-AR>β2-AR>β1-AR>β3-AR;在绵羊180日龄时,检测各基因丰度的关系为β2-AR> a2A-AR>β1-AR>β3-AR;绵羊脂肪组织中的β1-AR、β2-AR、β3-AR和a2A-AR基因在绵羊30日龄时表达水平均为最高,此时检测各基因丰度的关系为β2-AR>a2A-AR>β1-AR>β3-AR,此后各基因的表达水平随日龄增加总体呈降低趋势,但B3-AR基因在120日龄、B2-AR和a2A-AR基因在180日龄时,其表达水平又有所升高。尾脂发育水平与肾上腺素能受体基因表达水平相关性显示：随着绵羊日龄的增加,肌肉组织中B2-AR基因表达水平与绵羊的尾长、尾宽、尾高发育水平呈显著正相关；β1-AR.β3-AR基因表达水平与绵羊的尾长、尾宽、尾高发育水平呈极显著的止相关；a2A-AR基因表达水平与尾脂发育水平无显著相关性。脂肪组织中,B3-AR基因表达水平分别与尾长和尾高发育水平呈显著负相关。而a2A-AR和B2-AR基因表达水平与尾脂发育水平无显著性相关。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
第1章绪论  8-18
  1.1 肾上腺素能受体的类型  8-9
    1.1.1 a受体亚型  8
    1.1.2 β受体亚型  8-9
  1.2 肾上腺素能受体的分布  9-10
    1.2.1 a受体的分布  9
    1.2.2 β受体的分布  9-10
  1.3 肾上腺素能受体的结构  10-11
    1.3.1 a受体结构  10
    1.3.2 β受体结构  10-11
  1.4 肾上腺素能受体基因表达的研究  11-12
  1.5 肾上腺能受体的作用机理  12-13
  1.6 基因表达定量技术的发展  13-16
    1.6.1 传统的基因定量技术  13-14
    1.6.2 实时荧光定量PCR技术  14-16
  1.7 研究目的及意义  16-18
第2章舍饲条件下30～180日龄阿勒泰大尾羊体重及血液生理生化指标变化规律的研究  18-23
  2.1 试验材料与方法  18-19
    2.1.1 试验动物与饲养管理  18
    2.1.2 试验时间及地点  18-19
    2.1.3 试验仪器与试剂  19
  2.2 血液样本的采集及绵羊体重的测定  19
  2.3 血清生化指标测定  19
  2.4 数据统计与分析  19-20
  2.5 结果与分析  20-21
    2.5.1 阿勒泰大尾羊体重随日龄的变化规律  20
    2.5.2 阿勒泰大尾羊血液生化指标随日龄的变化规律  20-21
  2.6 讨论  21-22
  2.7 小结  22-23
第3章肾上腺素能受体基因随日龄的表达规律及其与尾脂发育水平关系的研究  23-48
  3.1 样品的采集及尾脂的测量  23-24
    3.1.1 样品的采集  23
    3.1.2 尾脂发育水平测定  23-24
  3.2 主要实验器材及试剂  24
    3.2.1 主要实验器材  24
    3.2.2 主要实验试剂  24
    3.2.3 常用溶液及其制备  24
  3.3 实验操作及方法  24-29
    3.3.1 RNA的提取  24-25
    3.3.2 去除RNA中的基因组DNA  25
    3.3.3 RNA的纯化  25-26
    3.3.4 cDNA的合成  26
    3.3.5 目的片段的克隆  26-29
  3.4 标准曲线的建立  29
    3.4.1 质粒的线形化及回收  29
    3.4.2 标准品的制备及标准曲线的生成  29
    3.4.3 样品实时荧光定量PCR  29
  3.5 数据统计与分析  29-30
  3.6 结果与分析  30-34
    3.6.1 RNA电泳结果  30-31
    3.6.2 目的片段PCR电泳  31
    3.6.3 线形化后质粒电泳  31-32
    3.6.4 基因序列的测定  32
    3.6.5 各基因标准曲线的生成  32-34
    3.6.6 不同基因的标准曲线方程  34
  3..7 样品实时荧光定量PCR结果  34-44
    3.7.1 基因RT-PCR扩增曲线  34-36
    3.7.2 基因的熔解曲线  36-38
    3.7.3 数据分析  38-44
  3.8 讨论  44-46
    3.8.1 肾上腺素能受体基因表达定量分析  44-45
    3.8.2 尾脂发育水平分析  45-46
    3.8.3 肾上腺素能受体基因表达水平与尾脂发育水平相关性分析  46
  3.9 小结  46-48
第4章总结论  48-49
参考文献  49-55
致谢  55-56
作者简介  56

阿勒泰绵羊脂肪及肌肉组织中肾上腺素能受体mRNA水平的发育性变化规律研究

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