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丙型肝炎病毒E2蛋白相互作用蛋白的研究

作　者: 张健
导　师: 成军
学　校: 中国人民解放军军医进修学院
专　业: 内科学
关键词: 相互作用蛋白肝炎病毒 E2蛋白丙型肝细胞蛋白人肝癌细胞全长编码序列蛋白编码基因靶基因片段蛋白相互作用
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

丙型肝炎病毒(HCV)感染致肝细胞损伤机制，很大程度上与病毒蛋白和肝细胞蛋白间的相互作用相关。因此，研究HCV各抗原成分与肝细胞内的蛋白相互作用及其机理能在一定程度上对HCV的致病机制做出解释，为寻找有效防治HCV的方法提供新线索。为研究HCV E2在HCV感染后病毒致病过程中的作用，我们应用酵母双杂交系统3，构建HCV E2诱饵质粒，转化酵母AH109，与含人白细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合，于涂有X-α-gal营养缺陷型培养基上筛选生长。挑选蓝色克隆，提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌提取质粒DNA后进行测序，然后进行生物信息学分析。我们将得到的其中一个未知功能的基因，命名为HCV EZ蛋白结合蛋白1(HCV EZBPI)。我们对HCV EZBPI进行了初步探讨。从人肝癌细胞中得到了HCv EZBPI基因的全长编码序列，构建真核表达载体pcDNA3.1卜)一HCVEZBPI，以及酵母表达载体pGBKT7一HCV EZBPI。进一步应用酵母双杂交(yea 5 t two一hyb:id)技术筛选HCV EZBpl与肝细胞文库结合的蛋白，并应用抑制性消减杂交(suppression subtraetive hybridization，SSH)技术，构建HCV EZBPI激活相关基因差异表达的cDNA消减文库，筛选相关的靶基因片段。在研究HCV EZ的酵母双杂交研究中，我们得到76个与EZ特异性结合的阳性克隆，其中包括14个未知功能基因。在新基因功能的研究方面，我们对其中一个未知功能的基因HCV EZBPI应用酵母双杂交及抑制性消减杂交技术进行了初步的研究，得到了一系列与HCv EZBPI有关系的蛋白编码基因。通过对HCV EZ及其新基因的研究，我们对该基因的功能有了初步的了解，为下一步更加具体的生物学功能、基因表达调控的深入研究开辟道路。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
主要仪器设备  8-10
英文缩略词  10-12
前言  12-14
第一部分酵母双杂交技术筛选HCVE2蛋白结合蛋白  14-22
  引言  15
  酵母双杂交技术筛选HCVE2蛋白结合蛋白  15-22
第二部分 HCV E2BP1克隆化及其功能学研究  22-46
  引言  23
  第一节 HCVE2蛋白结合蛋白1(HCV E2BP1)的克隆  23-27
  第二节 HCV E2BP1酵母双杂交饵载体构建及酵母双杂交技术筛选HCV E2BP1蛋白结合蛋白  27-31
  第三节 HCV E2BP1真核表达载体构建及抑制性消减杂交筛选HCV E2BP1反式调节基因  31-46
总结  46-47
文献综述  47-54
攻读硕士学位期间发表的文章  54-55
致谢  55-56

丙型肝炎病毒E2蛋白相互作用蛋白的研究

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