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自动化在线固相萃取HPLC/MS/MS方法的建立及其在药代动力学研究中的应用

作　者: 李小双
导　师: 宋海峰
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 药理学
关键词: 在线固相萃取 液质联用 药代动力学 葛根素 磷脂复合物
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 232次
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内容摘要


目的：建立、优化自动化在线（on-line）固相萃取（SPE）HPLC/MS方法，并应用于生物样品中小分子中药提取物葛根素的定量分析，研究比格犬口服葛根素磷脂复合物（PLC）胶囊后的药代动力学。方法：对萃取柱尺寸、填料、进样模式等条件进行优化；配有电喷雾离子源（ESI）的线性离子阱LTQ质谱仪用于生物样品中被分析物进行定量分析，采用选择离子反应监测（SRM）方式，用于定量分析的离子反应分别为m/z415.2→m/z195.2（葛根素）。用非房室模型统计矩方法计算药代动力学参数。结果和结论：1、自动化在线固相萃取HPLC/MS/MS法为在线稀释进样模式，在线固相萃取柱为窄径柱，选用Zobax C18球形填料。血清样品无需前处理，单个样品分析时间为6.5 min，并可利用单一固相萃取柱成功完成500余次的血清样品分析测定工作。2、该方法定量分析比格犬血清中葛根素含量法具有高通量、特异性好、灵敏度高的优点，其精密度、准确度、稀释度和各条件的稳定性也均可满足药代动力学研究的方法学要求。3、Beagle犬口服（po）不同剂量(55，220和880 mg·kg-1，葛根素含量25，100和400 mg·kg-1)葛根素磷脂复合物后，各剂量组峰浓度(Cmax)与AUC0-∞均有统计学意义差别（P<0.05），但中、高剂量组之间半衰期t1/2比较有显著统计学意义差别（P<0.05），CL在低-中、低-高剂量组之间也具有统计意义的差别，结果提示在研究剂量范围内，葛根素磷脂复合物在犬体内可能呈现非线性动力学过程。静脉给药后即刻血药浓度达峰，随后迅速分布、消除，各药代动力学参数与等当量po组比较均有显著性统计学差别。4、Beagle犬每天口服220mg·kg-1PLC一次，连续给药3天后，首次与第3次给药后绝大部分各时间点血清药物浓度相比无统计学差异（P>0.05），且各药代动力学参数均无统计学意义差别（P>0.05），提示重复给药后，药物在体内无明显蓄积现象。5、Beagle犬口服给药55mg·kg-1葛根素磷脂复合物后的绝对生物利用度平均为15.7±3.8％。

全文目录


中英文缩略词表  6-8
中文摘要  8-10
英文摘要  10-12
前言  12-16
第一部分 自动化在线SPE-HPLC/MS/MS法的建立及其用于葛根素定量的方法学确证  16-35
  1、目的和要求  16
  2、实验材料和方法  16-22
    2.1、药品和试剂  16
    2.2、主要仪器设备  16-17
    2.3、色谱分离分析和质谱检测条件  17-18
      2.3.1.色谱条件  17
      2.3.2.质谱条件  17-18
    2.4、在线固相萃取系统  18-21
      2.4.1.在线固相萃取系统的基本主要步骤  18-19
      2.4.2.在线固相萃取柱的填充和活化  19
      2.4.3.柱切换操作  19-21
    2.5、数据处理及计算  21-22
  3、实验结果  22-33
    3.1、在线固相萃取系统萃取条件的优化  22-27
      3.1.1 在线萃取柱尺寸的选择  22-23
      3.1.2 固相萃取填料的选择  23-25
      3.1.3 生物样品加载装置的设计和考核  25-27
    3.2、葛根素的方法学确证  27-33
      3.2.1.基质抑制效应  27
      3.2.2.标准曲线和线性范围  27
      3.2.3.最低定量下限(LLOQ)  27-30
      3.2.4.方法的准确度和精密度(日内精密度和日间精密度):用质控样品(准确度样品)显示结果  30-31
      3.2.5.稀释准确度  31
      3.2.6.稳定性  31-33
  4、结果和讨论  33-35
第二部分 自动化在线固相萃取HPLC/MS/MS法在葛根素磷脂复合物临床前药代动力学研究中的应用  35-58
  1、材料与方法  35-38
    1.1、药品和试剂  35
    1.2、实验动物  35
    1.3、实验方法  35-37
      1.3.1. 药液配制  35
      1.3.2. 给药途径、剂量和方式  35-36
      1.3.3.实验设计和分组  36
      1.3.4.取血  36
      1.3.5.血清样品的处理和测定  36-37
    1.4.药代动力学参数估算和统计分析  37-38
  2、实验结果  38-56
    2.1、Beagle犬单次po不同剂量PLC后血药浓度—时间变化  38-42
    2.2、Beagle犬单次静脉给药(iv)葛根素25mg·kg~(-1)后血药浓度—时间变化  42-46
    2.3、Beagle犬单次po或iv葛根素磷脂复合物或葛根素后的血清药物浓度的药代动力学  46-51
    2.4、Beagle犬连续po 220 mg·kg~(-1)PLC后血药浓度—时间变化  51-52
    2.5、Beagle犬连续po 220 mg·kg~(-1)PLC后的药代动力学参数  52-55
    2.6、Beagle犬po PLC后的生物利用度  55-56
  3、结果与讨论  56-58
结论  58-60
参考文献  60-64
致谢  64-65
自动化在线固相萃取HPLC/MS/MS法分析比格犬血浆中的葛根素含量  65-74

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学
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