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固相合成睡眠肽及成骨生长肽的研究

作　者: 孙元军
导　师: 王加宁；周仕学
学　校: 山东科技大学
专　业: 化学工艺
关键词: 固相合成睡眠肽成骨生长肽凝胶色谱反相高效液相层析
分类号: TQ464.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 23次
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内容摘要

本文首先对多肽的一些内容进行了简单介绍,包括多肽的概念、多肽的合成发展史、多肽的各种制备方法、基本原理、国内外研究现状、及其分析纯化方法和研究意义。主要研究了睡眠肽和成骨生长肽的Fmoc法固相合成及分离纯化,固相合成中系统地研究了树脂类型、保护基、缩合时间、反应溶剂、缩合剂、偶连率的测定方法和树脂切割条件对合成质量的影响,确立了最佳的工艺条件为:以DMF为反应溶剂,TBTU为缩合剂,TFA:对甲基苯酚:EDT:水为97:0.25:0.25:2.5(V/V)的切割液配制条件,3倍过量投料进行缩合反应,反应时间为3hr。此反应条件能够成功的合成睡眠肽和成骨生长肽。通过对睡眠肽和成骨生长肽的分离纯化研究,确立了纯化工艺为:先用凝胶色谱柱纯化,纯化后产品的纯度提高到60%,再以反相高效液相制备层析进行最终纯化,最终纯化结果纯度达到95%以上。此外,本文的其中一个目的是在原睡眠肽序列的基础上,引入了一段氨基酸序列,希望能够具有增强其穿透细胞膜作用,并进行了其生物活性测试。但是从测试结果看,没有明显的效果,成骨生长肽的穿膜活性实验因为时间有限,没有来得及做,下一步将继续测试其穿膜活性。论述了在合成这段序列过程中遇到的问题,并对其进行了分析,对后面的工作提出了一些建议。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-11
1 文献综述  11-29
  1.1 多肽的概念和性质  11-12
  1.2 多肽合成的发展史  12-13
  1.3 多肽制备的基本方法  13-17
  1.4 固相合成多肽的原理  17-19
  1.5 Fmoc固相合成中的偶连方法  19-20
  1.6 合成多肽的国内外研究发展现状  20-23
  1.7 多肽的分离纯化  23-26
  1.8 多肽的分析方法  26-27
  1.9 多肽合成的研究意义  27-29
2 睡眠肽的合成及纯化  29-41
  2.1 前言  29
  2.2 仪器和设备  29-30
  2.3 试剂  30-31
  2.4 实验装置图  31-33
  2.5 睡眠肽合成实验方案  33-38
  2.6 睡眠肽的质谱检测  38-39
  2.7 睡眠肽的分离纯化  39-41
3 增强睡眠肽的穿膜性及活性实验  41-45
  3.1 前言  41-42
  3.2 仪器和设备  42
  3.3 试剂  42
  3.4 合成装置图  42
  3.5 合成实验  42-43
  3.6 活性实验  43-45
4 成骨生长肽的合成及纯化  45-49
  4.1 前言  45
  4.2 仪器和设备  45-46
  4.3 试剂  46-47
  4.4 实验装置图  47
  4.5 成骨生长肽的合成实验  47
  4.6 成骨生长肽的定性检测  47-48
  4.7 成骨生长肽的分离纯化  48-49
5 实验结果与讨论  49-62
  5.1 树脂的选择及活化  49-52
  5.2 多肽合成中保护基的选择  52-53
  5.3 连结第一个氨基酸到树脂  53-54
  5.4 偶连率的测定  54-55
  5.5 连结第二个氨基酸到最后一个氨基酸  55-59
  5.6 多肽合成中裂解液的选择  59-60
  5.7 多肽合成结果的定性表征  60-61
  5.8 HPLC分析及纯化合成多肽  61
  5.9 活性实验结论  61-62
6 结论与建议  62-64
  6.1 结论  62
  6.2 对今后工作的建议  62-64
致谢  64-65
攻读硕士期间主要工作成果  65-66
参考文献  66-71

固相合成睡眠肽及成骨生长肽的研究

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