学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

几种寡肽的固相合成及其与DNA的相互作用

作　者: 王宏慧
导　师: 刘捷；卢奎
学　校: 河南工业大学
专　业: 有机化学
关键词: 阳离子肽抗氧化性肽固相合成 DNA 相互作用
分类号: R914
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 57次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

寡肽类化合物一般都具有较强的生物活性,多数可以作为药物或药物前体。研究药物、药物先导物和药物候选物与DNA之间的相互作用,探索它们之间的构效关系,对于认识药物作用机理以及设计新药具有重要的理论和实际应用价值。本论文主要包括以下内容:1采用Fmoc固相合成法设计合成了两类寡肽:一类是富含赖氨酸序列的阳离子肽（Cys-（Lys）₄和Cys-（Lys）₅-Ala）;另一类是抗氧化活性肽（Ala-His-His、Ala-His-Lys、β-Ala-His、Leu-Lys-Tyr）。其中Cys-（Lys）₄、Cys-（Lys）₅-Ala、Ala-His-His为新化合物, Ala-His-Lys、β-Ala-His、Leu-Lys-Tyr的固相法合成未见文献报道。2利用反相高效液相色谱,以C18柱进行分离制备了阳离子肽Cys-（Lys）₄和Cys-（Lys）₅-Ala,纯度分别为96.08%和97.33%。3利用IR、ESI-MS、¹H NMR、¹³C NMR对六种寡肽进行了表征,其结构如下:4通过紫外光谱、荧光光谱、粘度和凝胶电泳研究了六种寡肽与DNA的相互作用。（1）阳离子肽Cys-（Lys）₄和Cys-（Lys）₅-Ala与DNA之间存在较强的相互作用,其作用模式主要为部分嵌插作用。结合常数分别为2.53×10⁴ L·mol^-1、3.15×10⁴ L·mol^-1。两种阳离子肽均能高效猝灭EB-DNA荧光体系,猝灭常数分别为2.83×10⁴ L·mol^-1、8.98×10⁴ L·mol^-1。推测其机理可能是肽表面的正电荷与DNA的磷酸基团之间的静电吸引,使阳离子和DNA的空间结构有可能发生变化,以利于嵌入到DNA碱基中。（2）四种抗氧化性肽Ala-His-Lys、Ala-His-Lys、β-Ala-His、Leu-Lys-Try与DNA也能发生一定程度的相互作用,推测Ala-His-Lys、Ala-His-Lys、β-Ala-His与DNA的作用模式可能是静电结合或沟槽作用;Leu-Lys-Try与DNA作用模式存在着部分嵌插作用,并伴随静电结合。四种抗氧化肽与DNA的相互作用强弱顺序为Leu-Lys-Tyr>Ala-His-Ly>β-Ala-His>Ala-His-His。5.抗癌活性的筛选结果表明Cys-（Lys）₄和Cys-（Lys）₅-Ala均能有效的阻止致癌物对DNA的插入作用。这一结果为阳离子肽作为抗癌新药的筛选提供了理论支持。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-12
前言  12-27
  1.1 生物活性肽的研究现状  12-13
  1.2 多肽的合成  13-17
    1.2.1 液相法  13-14
    1.2.2 固相法  14-15
      1.2.2.1 Boc 法  14-15
      1.2.2.2 Fmoc 法  15
    1.2.3 无机磷试剂辅助下氨基酸自组装成肽  15-17
  1.3 肽的分离纯化方法  17-19
    1.3.1 色谱法  17-18
      1.3.1.1 离子交换色谱（IEXC）  17
      1.3.1.2 凝胶色谱（GPC）  17-18
      1.3.1.3 反相高效液相色谱（RP-HPLC）  18
      1.3.1.4 高效液相色谱与其他分离纯化方法联用  18
    1.3.2 超滤法（UF）  18
    1.3.3 毛细管电泳(CE)  18-19
  1.4 肽的分析方法  19-20
    1.4.1 质谱分析  19-20
    1.4.2 核磁共振(NMR)  20
  1.5 小分子化合物与DNA 的相互作用  20-25
    1.5.1 小分子化合物与DNA 的作用模式  20-22
      1.5.1.1 共价结合  20-21
      1.5.1.2 剪切作用  21
      1.5.1.3 长距组装  21
      1.5.1.4 非共价作用  21-22
    1.5.2 小分子与DNA 相互作用的研究方法  22-25
      1.5.2 1 紫外-可见吸收光谱  22-23
      1.5.2 2 荧光光谱法  23
      1.5.2.3 线二色光谱(LD)和圆二色谱（CD）  23
      1.5.2.4 拉曼光谱  23-24
      1.5.2.5 红外光谱  24
      1.5.2.6 电化学法  24
      1.5.2.7 粘度法  24
      1.5.2.8 凝胶电泳法  24-25
  1.6 本课题的选题意义和主要内容  25-27
第二章寡肽的固相合成、分离及表征  27-45
  2.1 实验部分  27-30
    2.1.1 试剂  27
    2.1.2 仪器  27-28
    2.1.3 实验方法  28-29
      2.1.3.1 肽的合成路线  28
      2.1.3.2 Cys-(Lys)_4 五肽的合成  28-29
      2.1.3.3 Cys-(Lys)_5-Ala 的合成  29
      2.1.3.4 Ala-His-His 的合成  29
      2.1.3.5 Ala-His-Lys 的合成  29
      2.1.3.6 β-Ala-His 的合成  29
      2.1.3.7 Leu-Lys-Tyr 的合成  29
    2.1.4 色谱条件的选择  29-30
      2.1.4.1 阳离子型Cys-(Lys)_4 五肽的液相色谱分析条件  29-30
      2.1.4.2 阳离子型Cys-(Lys)_5-Ala 七肽的液相色谱分析条件  30
      2.1.4.3 阳离子型Cys-(Lys)_5-Ala 七肽的液相色谱制备条件  30
    2.1.5 质谱分析  30
    2.1.6 红外光谱分析  30
    2.1.7 核磁共振分析  30
  2.2 结果讨论  30-43
    2.2.1 Cys-(Lys)_4 和Cys-(Lys)_5-Ala 质谱分析和HPLC 分离  31-34
      2.2.1.1 Cys-(Lys)_4 的ESI-MS 和RP-HPLC 分离  31-32
      2.2.1.2 Cys-(Lys)_5-Ala 的ESI-MS 和RP-HPLC 分离  32-34
    2.2.2 Cys-(Lys)_4 和Cys-(Lys)_5-Ala 的红外光谱  34-35
    2.2.3 Cys-(Lys)_4 的核磁共振波谱  35-37
    2.2.4 Cys-(Lys)_5-Ala 的核磁共振波谱  37-38
    2.2.5 Ala-His-His、Ala-His-Lys、β-Ala-His、Leu-Lys-Tyr 的质谱分析  38-40
    2.2.6 Ala-His-His、Ala-His-Lys、β-Ala-His 的多级质谱裂解规律  40-43
  2.3 小结  43-45
第三章寡肽与DNA 的相互作用  45-67
  3.1 实验部分  45-49
    3.1.1 试剂  45
    3.1.2 仪器  45-46
    3.1.3 实验方法  46-49
      3.1.3.1 寡肽的合成  46
      3.1.3.2 溶液的配制  46-47
      3.1.3.3 DNA 溶液浓度的确定  47
      3.1.3.4 紫外光谱法  47
      3.1.3.5 荧光猝灭光谱法  47-48
      3.1.3.6 粘度法研究肽与DNA 的相互作用  48
      3.1.3.7 琼脂糖凝胶电泳  48-49
  3.2 结果讨论  49-65
    3.2.1 寡肽与DNA 相互作用的紫外光谱研究  49-54
      3.2.1.1 CT-DNA、Cys-(Lys)_4、Cys-(Lys)_5-Ala 的紫外吸收光谱  49
      3.2.1.2 阳离子肽与DNA 相互作用的紫外吸收光谱  49-51
      3.2.1.3 离子强度对阳离子肽-DNA 体系的紫外光谱影响  51-52
      3.2.1.4 抗氧化性肽与CT-DNA 的紫外吸收光谱  52-54
    3.2.2 荧光猝灭光谱研究  54-61
      3.2.2.1 阳离子肽对EB-DNA 体系的荧光光谱  54-57
      3.2.2.2 I- 离子对DNA-EB 和阳离子肽相互作用的影响  57
      3.2.2.3 五肽Cys-(Lys)_4 和七肽Cys-(Lys)_5-Ala 抗癌活性的筛选  57-58
      3.2.2.4 抗氧化性肽的荧光光谱的研究  58-61
    3.2.3 小牛胸腺DNA 粘度的测定  61-63
    3.2.4 凝胶电泳法  63-65
  3.3 小结  65-67
结论  67-69
参考文献  69-79
致谢  79-80
个人简介  80

几种寡肽的固相合成及其与DNA的相互作用

内容摘要

全文目录

相似论文