学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

中国孤雌生殖卤虫胚胎发育相关基因的研究

作　者: 林盛国
导　师: 侯林
学　校: 辽宁师范大学
专　业: 海洋生物学
关键词: 中国孤雌生殖卤虫 胚胎发育 mRNA差异显示 硝酸银
分类号: Q953
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
下　载: 117次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


卤虫（Artemia）属于甲壳纲（Crustasea）,鳃足亚纲（Branchiopoda）,无甲目（Anostacea）,卤虫科（Artemidae）,卤虫属（Artemia）,通常分布于内陆盐湖和海岸盐田中。本研究采用mRNA差异显示方法分离中国孤雌生殖卤虫早期胚胎发育相关基因。以发育0h、4h、8h、12h、16h和10d的中国孤雌生殖卤虫的总RNA为模板,用Oligod（T）13M（M分别为A、C、G）3种锚定引物和26种随机引物组合进行DDRT-PCR,经6%非变性PAGE凝胶电泳后,用硝酸银染色显示差异条带,共得到286条胚胎发育相关差异DNA片段,片段长度250—2000bp左右。对其中24条差异片段进行克隆测序,测序结果通过GenBank/EMBL/DDBJ/进行BLAST检索分析。结果发现Seq1、Seq2片断与已知基因有较高的同源性,其余片段与已知基因同源性较低。其中Seq1序列与编码罗非鱼的肌酸激酶基因有较高的同源性,517个碱基中有482个碱基是相同的,同源性达到了92%,Score=747,E=0。用BLASTX进一步比对表明:Seq1序列与罗非鱼的肌酸激酶有很高的同源性,部分序列同源性达到了88%,Score=300,E=3e-80。分离胶显示该基因在孤雌生殖卤虫胚胎发育至16h、10d时表达量增多。RT-PCR和测序结果进一步证明在卤虫胚胎发育至16h和10d时Seq1基因确实存在。Seq1为编码中国孤雌生殖卤虫肌酸激酶基因的一部分,该基因与中国孤雌生殖卤虫早期胚胎发育有着密切的关系。Seq2 BLAST分析表明与线虫丝氨酰tRNA合成酶有较高的同源性,100个氨基酸中有55个是相同的,Score=113,E=2e—24。Seq1和Seq2在胚胎发育中的具体作用还有待于进一步研究。其它同源性较低的片段可能为未知新基因,对这些序列信息进行进一步研究将有助于获得完整基因和了解中国孤雌生殖卤虫早期胚胎发育的机制。

全文目录


摘要  4-5
1 文献综述  5-20
  1．1 卤虫相关基因的研究和生物学特征  5-15
    1．1．1 卤虫相关基因的研究  5-7
    1．1．2 卤虫分子生物学方面的研究  7-9
    1．1．3 卤虫的生物学特征  9-15
    1．1．4 卤虫研究存在的问题  15
  1．2 克隆新基因的常用方法  15-20
    1．2．1 序列克隆法  15-16
    1．2．2 功能克隆法  16
    1．2．3 cDNA文库的构建与全长cDNA的克隆  16
    1．2．4 基因表达的序列分析  16-17
    1．2．5 消减杂交和抑制消减杂交  17
    1．2．6 外显子捕捉  17-18
    1．2．7 mRNA差异显示  18-20
2 材料与方法  20-30
  2．1 材料  20-23
    2．1．1 卤虫孵化及培养条件  20
    2．1．2 主要试剂  20-23
    2．1．3 主要仪器  23
  2．2 方法  23-30
    2．2．1 总RNA的提取  23-24
    2．2．2 总 RNA模板的纯化  24
    2．2．3 RNA分子量和浓度的测定  24
    2．2．4 反转录  24-25
    2．2．5 PCR扩增和产物的凝胶电泳  25
    2．2．6 硝酸银染色和差异条带的回收  25-26
    2．2．7 成像  26
    2．2．8 差异条带的回收  26
    2．2．9 差异条带的再扩增  26-27
    2．2．10 差异条带的纯化  27
    2．2．11 差异片段的克隆  27-28
    2．2．12 克隆片断的筛选  28
    2．2．13 克隆片断的富集  28-29
    2．2．14 质粒的提取  29
    2．2．15 差异片段的测序  29
    2．2．16 RT-PCR和测序验证  29-30
3 结果  30-43
  3．1 总RNA的质量  30
  3．2 差异显示PCR结果  30-31
  3．3 序列结果及同源性分析  31-42
    3．3．1 Seq1 Query=(866 letters)  32-37
    3．3．2 Seq2 Query=(301 letters)  37-39
    3．3．3 Seq3 Query=(626 letters)  39-40
    3．3．4 Seq4 Query=(468 letters)  40-42
  3．4 RT-PCR和测序验证  42-43
4 讨论  43-55
  4．1 序列同源性比较结果的分析  43-52
    4．1．1 序列结果的分析  43
    4．1．2 同源性比较结果分析  43-52
  4．2 差异显示方法的改进  52-55
5 结论  55-56
Abstract  56-58
参考文献  58-67
致谢  67-68
学位论文独创性声明  68
学位论文版权的使用授权书  68

相似论文

  1. 江蓠为基质的双齿围沙蚕亲体培育及个体早期发育研究,S968.9
  2. 萝卜镉胁迫响应相关基因克隆及其表达分析,S631.1
  3. 鸭早期胚胎发育相关基因消减文库的构建与分析,S834
  4. 锯缘青蟹黄水病的血液指标及组织基因表达差异研究,S945
  5. 高效液相色谱法检测孕妇血清中BBP、DBP的含量及其可能的毒理学意义,R114
  6. MyD88在中国卤虫不同发育时期及在革兰氏菌刺激下的表达模式,Q78
  7. 尿素包合法和银化柱层析分离脂肪酸及尿素包合结晶物的研究,TQ460.1
  8. QSA基因表达规律的研究及QSA抗原制备,R392.1
  9. Ube2e3在小鼠胚胎发育阶段的表达分析,Q75
  10. 七叶树生殖生物学研究,Q944.4
  11. 银离子金属复合材料生物创面膜的研究,R318.08
  12. 偕二硝基化合物合成新工艺研究,TQ226.1
  13. 长角血蜱胚胎发育的研究,S917.4
  14. 中华锯齿米虾性腺发育与生殖细胞发生,S917.4
  15. 寿胎丸对大鼠妊娠期及胚胎发育生殖安全性的影响,R285.5
  16. 抗哮喘传统中药椒目的现代药学研究,R287
  17. 不同剂量硝酸银和滑石粉对胸膜粘连效果以及肺损伤的实验研究,R655.3
  18. AI429618在小鼠胚期表达的探究,Q75
  19. 一种简捷的合成N-羟甲基苯甲酰胺和缩氨醛衍生物的方法,TQ24
  20. N-酰基氨基酸在S_2O_8~（2-）/Ag~+/Cu~（2+）作用下的氧化脱羧反应研究,O621.25
  21. 海藻油中分离纯化多烯脂肪酸的研究,R914

中图分类: > 生物科学 > 动物学 > 动物遗传学
© 2012 www.xueweilunwen.com