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长角血蜱胚胎发育的研究

作　者: 郑建美
导　师: 刘敬泽
学　校: 河北师范大学
专　业: 动物学
关键词: 长角血蜱组织学胚胎发育生化分析
分类号: S917.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

蜱类为专性吸血的外寄生动物,不仅传播多种病原体而且还有很强的繁殖力。每只雌蜱一生能产卵几百至几千粒,蜱类的繁殖力决定了其种群数量及危害程度。所以了解蜱卵胚胎发育的规律对预测其幼虫出现的时期,掌握防治时机有重要的实践意义。本文以广泛分布于我国的长角血蜱Haemaphysalis longicornis Neumann为研究对象,运用组织学、激光共聚焦技术、SDS-PAGE、生物化学、免疫印迹、气相色谱/质谱(GC/MS)等现代生物学的研究方法,首次对其胚胎发育过程中的形态和物质变化进行了较系统的研究,揭示了蜱类胚胎发育的规律。主要结果如下:1、建立了适合长角血蜱卵的石蜡切片技术体系:以10%次氯酸钠溶液软化卵壳3~5 min,用Smith液固定24h,用系列乙醇脱水,二甲苯透明,得出了最佳脱水和透明条件。2、获得了较为系统的胚胎发育不同时期的实体照片,这些时期包括胚盘形成、胚带形成、器官形成等发育时期。3、SDS-PAGE结果显示:胚胎发育中,156KD、150KD、120KD、107KD、68KD、17KD、18KD、20KD、21KD和22KD蛋白的动态变化均出现在长角血蜱形态发生的不同时期。4、卵黄蛋白(Vn)的Western-blot分析结果显示:Vn的八个亚基在胚胎发育中有不同程度的消耗,幼虫非寄生期的营养来源来自Vn。5、经夹心ELISA检测, Vn在胚胎发育中逐渐被利用,尤其在胚胎发育早期(由3.016μg/egg降到1.601μg/egg)和器官形成期由(1.907μg/egg降到1.394μg/egg)利用率最高。6、测定了长角血蜱胚胎发育过程中的蛋白、糖、脂、水分的变化;初步探讨了胚胎发育中的主要能源物质为蛋白和脂类;糖参与了几丁质的合成;在胚胎晚期,大量的水分用于增加内压使幼虫突破卵壳。7、应用GC/MS技术测定出长角血蜱胚胎发育中的主要化学物质。结果显示:长角血蜱胚胎发育中共有19中化学物质,分别为十七烷酸、二十五烷、棕榈酸等。在胚胎发育的不同时期出现了特定的化学物质,保证了胚胎发育的顺利完成。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-8
第一章绪论  8-15
  1.1 蜱类胚胎发育研究概况  8-9
  1.2 蜱类胚胎发育的过程  9-10
  1.3 组织切片技术在胚胎发育中的应用  10-11
  1.4 蜱类胚胎发育中生化物质的变化  11-13
    1.4.1 蛋白  11-12
    1.4.2 脂类  12
    1.4.3 糖  12-13
    1.4.4 水分  13
  1.5 研究背景  13-14
  1.6 研究的目的和意义  14-15
第二章长角血蜱胚胎形态发生研究  15-26
  2.1 材料与方法  15-19
    2.1.1 整体透明法  15
    2.1.2 石蜡切片法  15-18
    2.1.3 激光共聚焦（confocal）技术  18
    2.1.4 主要试剂及配制  18-19
  2.2 结果  19-24
    2.2.1 长角血蜱卵的外部特征  19-20
    2.2.2 长角血蜱卵的内部特征  20
    2.2.3 长角血蜱胚胎发育的过程  20-24
  2.3 小结  24-26
第三章长角血蜱胚胎发生过程中生化物质的变化  26-42
  3.1 材料与方法  26-30
    3.1.1 卵的收集与蛋白提取  26
    3.1.2 蛋白含量测定  26-27
    3.1.3 胚胎发育不同时期蛋白分析  27-28
    3.1.4 脂类的提取及成分分析  28
    3.1.5 糖的提取及含量测定  28-29
    3.1.6 水分测定  29
    3.1.7 主要试剂及配制  29-30
  3.2 结果  30-40
    3.2.1 胚胎发育不同时期的总蛋白含量的变化  30-31
    3.2.2 胚胎发育不同时期卵黄蛋白(Vn) 含量的变化  31-32
    3.2.3 胚胎发育不同时期的SDS-PAGE 分析  32
    3.2.4 胚胎发育不同时期的Vn 的免疫印迹（Western-blot）  32-33
    3.2.5 胚胎发育不同时期脂类含量的变化  33-34
    3.2.6 胚胎发育不同时期脂类成分的GC-MS 分析  34-39
    3.2.7 胚胎发育不同时期糖含量的变化  39-40
    3.2.8 胚胎发育不同时期水分含量的变化  40
  3.3 小结  40-42
第四章讨论  42-46
  4.1 蜱卵切片体系的建立  42
  4.2 胚胎发育过程中的重要过程  42-43
    4.2.1 胚盘的形成方式  42
    4.2.2 消黄细胞的形成  42
    4.2.3 蜱类消化道的发育过程  42-43
    4.2.4 胚动  43
    4.2.5 附肢的形成  43
  4.3 胚胎发育中生化成分的测定  43-46
第五章结论  46-47
第六章存在问题及展望  47-48
参考文献  48-52
致谢  52-53
个人简历  53

长角血蜱胚胎发育的研究

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