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肌肽对DNA氧化损伤的作用及其机制的研究

作　者: 黄进
导　师: 李宏基；杨国宇
学　校: 河南农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 肌肽自由基 DNA氧化损伤抗氧化剂
分类号: Q504
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

DNA是生命的遗传物质,DNA的损伤引发多种疾病。因此寻求有效的、天然的保护DNA的药物具有重要的理论价值和实际意义。肌肽是由L-组氨酸和β-丙氨酸组成的二肽,是一种存在于动物体内的具有多种功效的天然抗氧化剂。本论文采用TBA法,化学发光法测定了肌肽在四种不同体系中对DNA氧化损伤的作用。这四种体系为:1、phen-Cu²⁺-VitC体系,2、BLMA₅-Fe²⁺体系,3、VitC-Fe²⁺体系,4、phen-Cu²⁺-VitC-H₂O₂体系。设常用抗氧化剂甘露醇、苯甲酸钠、二甲基亚砜做对照,比较了它们抗氧化能力的强弱,并检测了肌肽的组成成分L-组氨酸、β-丙氨酸、咪唑在这四种不同体系中对DNA损伤的作用,绘制了抑制动力学曲线,希望通过这几种物质抗氧化行为动力学曲线的比较,找出肌肽对DNA氧化损伤作用的保护机制。体系Ⅰ利用phen-Cu²⁺-VitC体系产生OH,对DNA造成损伤,采用TBA法测定了加入5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L四种浓度的肌肽后体系512nm光吸收值。结果表明肌肽对由phen-Cu²⁺-VitC体系引起的DNA损伤有明显的抑制作用（P<0.05）,且随着肌肽浓度的增大,对DNA损伤的抑制作用增强。20mmol/L时,与β-丙氨酸、甘露醇、苯甲酸钠、二甲基亚砜相比,肌肽的抗氧化活性显著高与甘露醇等抗氧化剂（p<0.05）;与L-组氨酸相比没有显著差异且肌肽的抗氧化动力学曲线与L-组氨酸相似。在phen-Cu²⁺-VitC体系中肌肽等物质对脱氧核糖的损伤没有显著的差异（P>0.05）。体系Ⅱ用BLMA₅-Fe²⁺体系对DNA造成损伤,用TBA法检测了加入肌肽、甘露醇等抗氧化剂后DNA在该体系中损伤程度的变化。结果表明,肌肽、L-组氨酸浓度小于8mmol/L时对DNA损伤具有明显的促氧化作用,浓度大于此浓度时对DNA损伤的抑制率显著增高,抗氧化活性大于甘露醇等常用抗氧化剂（p<0.05）。肌肽的抗氧化动力学曲线与L-组氨酸相似。在本实验过程中我们还观察到博莱霉素对脱氧核糖不切割(OD₅₃₂值0.056)。体系Ⅲ以VitC-Fe²⁺系统产生过氧化氢和羟自由基对DNA造成氧化损伤产生MDA物质为基础,采用TBA法在脱氧核糖水平上检测肌肽对DNA氧化损伤的作用。设咪唑,L-组氨酸,β-丙氨酸,甘露醇,苯甲酸钠,二甲基亚砜为对照,对它们抗氧化能力的强弱做了比较,并对其抗氧化机理做了初步探讨,结果发现在本实验条件下肌肽对DNA损伤有明显的抑制作用（p<0.01）,且随着肌肽浓度的增大抗DNA损伤的能力增强。10mmol/L时肌肽在VitC-Fe²⁺系统中对DNA损伤的抑制率为78.38%,而苯甲酸钠为1.88%,甘露醇为18.98%,肌肽的抗氧化能力明显优于苯甲酸钠等常用抗氧化剂（p<0.01）。其抗氧化动力学曲线与咪唑相似,提示其抗氧化机理与咪唑环有关。在该体系中苯甲酸钠浓度较低时对DNA和脱氧核糖都有轻微的促氧化作用。肌肽、、咪唑、甘露醇、L-组氨酸、β-丙氨酸对脱氧核糖损伤有显著的保护作用（p<0.01）体系Ⅳ采用化学发光法检测了在Phen-Cu²⁺-VitC-H₂O₂-DNA系统中加入肌肽、L-组氨酸、

全文目录

摘要  8-10
1 文献综述  10-21
  1.1 肌肽  10-12
    1.1.1 肌肽的历史  10
    1.1.2 肌肽的生理功能  10-12
  1.2 自由基  12-16
    1.2.1 自由基的产生  12-14
    1.2.2 自由的危害  14-15
    1.2.3 自由基的作用  15-16
    1.2.4 自由基的测定方法  16
  1.3 常见抗氧化剂的种类及其作用机制  16-21
    1.3.1 内源性抗氧化剂  17-18
    1.3.2 中草药  18
    1.3.3 维生素  18-19
    1.3.4 微量元素  19-20
    1.3.5 合成抗氧化剂  20-21
2 引言  21-22
3 材料与方法  22-26
  3.1 体系Ⅰphen—Cu~(2+)-VitC系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用  22
    3.1.1 试剂、仪器  22
    3.1.2 实验方法  22
    3.1.3 数据分析  22
  3.2 体系ⅡBLMA_5-Fe~(2+)系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用  22-23
    3.2.1 试剂、仪器  22-23
    3.2.2 实验方法  23
  3.3 体系ⅢVitC-Fe~(2+)系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用  23
    3.3.1 试剂、仪器  23
    3.3.2 实验方法  23
  3.4 体系Ⅳ化学发光发检测肌肽的抗氧化活性  23-26
    3.4.1 试剂、仪器  23-24
    3.4.2 化学发光体系的建立  24
    3.4.3 实验方法  24-26
4 结果与分析  26-36
  4.1 体系Ⅰphen-Cu~(2+)-VitC系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用  26-28
    4.1.1 肌肽等抗氧化剂对DNA氧化损伤的影响  26-27
    4.1.2 肌肽等抗氧化剂对脱氧核糖氧化损伤的影响  27-28
  4.2 体系ⅡBLMA_5-Fe~(2+)系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用  28-29
  4.3 体系ⅢVitC-Fe~(2+)系统中肌肽对DNA氧化损伤的作用  29-32
    4.3.1 肌肽等抗氧化剂对DNA氧化损伤的影响  29-30
    4.3.2 肌肽等抗氧化剂对脱氧核糖氧化损伤的影响  30-32
  4.4 体系Ⅳ化学发光发检测肌肽的抗氧化活性  32-36
    4.4.1 化学发光体系的建立  32
      4.4.1.1 温度的影响  32
      4.4.1.2 Phen浓度的影响  32
      4.4.1.3 Cu~(2+)浓度的影响  32
      4.4.1.4 VitC浓度的影响  32
      4.4.1.5 H_2O_2浓度的影响  32
      4.4.1.6 DNA浓度的影响  32
    4.4.2 phen-Cu~(2+)-VitC系统中DNA的降解发光  32-33
    4.4.3 肌肽对DNA损伤产物发光动力学的影响  33-35
    4.4.4 肌肽与甘露醇的比较  35-36
5 讨论  36-41
  5.1 体系Ⅰphen-Cu~(2+)-VitC系统中肌肽对DNA损伤的作用  36-37
    5.1.1 OH的产生体系  36
    5.1.2 DNA链的降解  36-37
    5.1.3 肌肽的保护作用  37
  5.2 体系ⅡBLMA_5-Fe~(2+)系统中肌肽对DNA损伤的作用  37-39
    5.2.1 DNA链的降解  37-38
    5.2.2 肌肽的作用  38-39
  5.3 体系ⅢVitC-Fe~(2+)系统中对DNA损伤的作用  39
    5.3.1 DNA链的降解  39
    5.3.2 肌肽对DNA的作用  39
  5.4 体系Ⅳ化学发光法检测肌肽对DNA氧化损伤的作用  39-41
    5.4.1 phen-Cu~(2+)-VitC-H_2O_2-DNA系统中DNA的可能降解发光过程  39-40
    5.4.2 肌肽对DNA损伤的作用  40-41
6 结论  41-42
参考文献  42-48
英文摘要  48-49

肌肽对DNA氧化损伤的作用及其机制的研究

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