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仔猪肠道益生菌的分离筛选及生物学特性研究

作　者: 张丽芳
导　师: 田洪涛；王占武
学　校: 河北农业大学
专　业: 农产品加工及贮藏工程
关键词: 仔猪腹泻益生菌分离筛选:生物特性抑菌机理廉价培养基
分类号: S852.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
下　载: 479次
引　用: 4次
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内容摘要

腹泻是影响仔猪成活率的主要疾病之一,参考资料报道,因腹泻导致仔猪死亡占仔猪死亡总数的39.8%。目前,仔猪腹泻的防治主要使用抗生素,但耐药菌的产生、抗生素污染等问题已引起人们的高度重视。微生态制剂（又称益生菌制剂）在防治肠道疾病方面,不仅安全无害,无残留,不产生抗药性,还有提高饲料利用率,促进动物生长,改善产品品质等作用,是国内外研究的热点,但防效低和使用成本较高是推向实用的瓶颈。本研究旨在从仔猪肠道中筛选防治效果显著、制剂生产性能优良的益生菌菌株,并对其功能和生物学特性进行研究,为仔猪专用高效益生菌制剂的研制提供材料和技术支持。对利于乳酸菌和致病性大肠杆菌共同生长培养基进行了筛选研究。以营养肉汤为基础培养基,对常用的7种营养因子进行了单因子筛选试验,明确了葡萄糖和吐温两种物质利于乳酸菌和致病性大肠杆菌的生长,在添加两种物质的肉汤培养基中,乳酸菌和致病性大肠杆菌的活菌数量均可达到1×10⁸cfu/mL以上。采用L₉3⁴正交试验,筛选出适合乳酸菌和致病性大肠杆菌生长的最佳培养基组合,其培养基配方为:牛肉膏0.9%、蛋白胨0.7%、吐温0.1%、葡萄糖1%。采用平板倾注法,从来自不同地点、不同品种、不同日龄健康仔猪粪便中共分离获得128株乳酸菌。以致病性大肠杆菌K88、K99为防治靶标,初筛出具有较强抑菌活性的菌株25株;通过耐酸、耐胆盐、生长速率等生物学特性比较,确定编号为1-3的菌株的综合性能最佳。经鉴定1-3菌株是一株戊糖乳杆菌（L.pentosum）。该菌的生长温度为15～42℃,生长pH为4～9;最适生长温度37℃,最适生长pH为7。进行了1-3活菌制剂防治仔猪腹泻的活体试验。以8头健康长白母猪所产的90头仔猪为试验材料,随机分组进行了腹泻预防试验,设空白为对照。研究结果为,1-3活菌制剂预防组的腹泻率为8.51%,对照组为78.57%,差别极显著（p<0.01）。对空白组出现腹泻的仔猪进行了治疗比较试验,庆大霉素为对照。结果,1-3制剂治疗组的总有效率为100%,治愈率76.47%,平均疗程5d;庆大霉素治疗组的有效率为93.75%,治愈率仅为31.25%,平均疗程6d,差别显著（P<0.05）。此外,与对照比较,1-3制剂预防组仔猪的精神状态好,毛色光亮,粪便成型;即使个别出现腹泻情况,连续灌服乳酸菌制剂两天（1次/天）,即可痊愈。初步探讨了1-3菌株的抑菌机理。对1-3菌株的MRS发酵液、发酵滤液、中和滤液进行了抑菌试验。结果,发酵液和发酵滤液的抑菌活性无显著差别,表明1-3菌株的抑菌物质为胞外代谢产物;中和滤液仍有抑菌活性,说明除乳酸外,还有其它非酸抑菌物质,具体类别和结构有待深入研究。发酵液经70℃、100℃、121℃处理20nin后仍有抑菌活性,说明抑菌物质具有耐热性。进行了廉价增殖培养基的筛选试验。分别以价廉易得、周年供应期长的番茄和胡

全文目录

1 引言  11-18
  1.1 仔猪腹泻的防治现状及存在的问题  11
  1.2 国内外微生态制剂研究及应用进展  11-13
    1.2.1 乳酸菌制剂  12
    1.2.2 芽孢杆菌制剂  12-13
    1.2.3 光和细菌制剂  13
  1.3 微生态制剂的作用机理  13-14
    1.3.1 恢复肠道优势种群  13
    1.3.2 生物拮抗作用  13-14
    1.3.3 生物夺氧  14
    1.3.4 增强免疫，抵御感染  14
    1.3.5 促进营养物质吸收，提高饲料转化率  14
  1.4 影响微生态制剂应用效果的主要因素  14-16
    1.4.1 菌株的选择  14-15
    1.4.2 使用剂量  15
    1.4.3 动物生理状态  15
    1.4.4 制剂中的活菌数量  15-16
  1.5 本研究的目的意义、研究内容及技术关键  16-18
    1.5.1 研究目的  16
    1.5.2 研究意义  16
    1.5.3 研究内容  16-17
    1.5.4 技术关键  17-18
2 材料与方法  18-27
  2.1 培养基  18-20
    2.1.1 乳酸菌培养基  18
    2.1.2 大肠杆菌培养基  18
    2.1.3 鉴定乳酸杆菌用培养基  18-19
    2.1.4 乳酸菌天然增殖培养基  19-20
  2.2 试验材料  20-21
  2.3 试验仪器  21
  2.4 试验方法  21-27
    2.4.1 适合乳酸杆菌和大肠杆菌同时生长培养基的筛选优化  21-22
    2.4.2 目的菌株的分离与筛选  22
    2.4.3 菌株生物学特性研究  22-23
    2.4.4 目的菌株最适生长温度和pH值试验  23
    2.4.5 目的菌株抗生素敏感试验  23
    2.4.6 目的菌株生理生化特性研究与菌种鉴定  23-25
    2.4.7 防治仔猪腹泻活体试验  25
    2.4.8 目的菌株抑菌机理初步研究  25-26
    2.4.9 廉价增殖培养基的筛选  26
    2.4.10 液态制剂活菌存活试验  26-27
3 结果与分析  27-51
  3.1 适合乳酸菌和致病性大肠杆菌共同生长培养基的筛选  27-30
    3.1.1 适合乳酸菌和致病性大肠杆菌共同生长培养基营养因子筛选  27-28
    3.1.2 适合乳酸菌及致病性大肠杆菌共同生长复合培养基的筛选  28-30
    3.1.3 最佳培养基中乳酸菌、大肠杆菌生长曲线的测定  30
  3.2 目的菌株的分离与筛选  30-32
  3.3 待选菌株生物学特性比较  32-37
    3.3.1 生长速率测定与比较  32-33
    3.3.2 不同pH条件下菌体存活或增殖比较  33-35
    3.3.3 耐胆盐特性比较  35
    3.3.4 不同温度处理菌体存活特性比较  35-37
    3.3.5 小结  37
  3.4 目的菌株最适生长温度和pH值测定  37-39
    3.4.1 最适生长温度测定  37-38
    3.4.2 最适pH值的测定  38-39
  3.5 1-3菌株对抗生素敏感性实验  39-40
  3.6 1-3菌株生理生化特性研究  40-41
    3.6.1 菌体形态及菌落形态  40
    3.6.2 乳酸分析  40-41
    3.6.3 生理生化特性  41
  3.7 活体试验  41-42
    3.7.1 预防效果  41-42
    3.7.2 治疗效果  42
  3.8 1-3菌株抑菌机理探讨  42-46
    3.8.1 非酸性抑菌物质的判断  42-43
    3.8.2 不同培养时间抑菌活性的比较  43-45
    3.8.3 抑菌物质热稳定性试验  45-46
  3.9 廉价增殖培养基的筛选  46-50
    3.9.1 基础培养基的选择  46-47
    3.9.2 利于菌体增殖营养因子的筛选  47-48
    3.9.3 复合胡萝卜汁增殖培养基的筛选  48-50
  3.10 液态乳酸菌制剂保存性试验  50-51
4 讨论  51-53
  4.1 关于适合乳酸菌及大肠杆菌同时生长培养基的筛选  51
  4.2 关于分离样品的来源  51
  4.3 关于菌株分离方法的采用  51
  4.4 抑菌试验方法的选用  51-52
  4.5 活体试验  52
  4.6 1-3抑菌机理探讨  52
  4.7 乳酸菌廉价培养基的获得  52
  4.8 今后待开展的工作  52-53
5 结论  53-54
参考文献  54-59
在读期间发表的学术论文  59-60
个人简历  60-61
致谢  61

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