学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

烟夜蛾（Helicoverpa assulta）与甜菜夜蛾（Spodoptera exigua）钠离子通道基因片段的克隆和测序

作　者: 纠敏
导　师: 马继盛；杨效文
学　校: 河南农业大学
专　业: 农业昆虫与害虫防治
关键词: 烟夜蛾甜菜夜蛾击倒抗性钠离子通道突变
分类号: S433.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
下　载: 102次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

应用PCR(polymerase chain reaction)技术克隆并测序了室内经氰戊菊酯筛选7代的烟夜蛾(Helicoverpa assulta)抗性、敏感种群以及甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)自然种群的钠离子通道部分基因序列，并将三者相应的核苷酸及编码的氨基酸序列进行了比较，试图从分子水平上来考察烟夜蛾和甜菜夜蛾自然种群对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性机制是否与击倒抗性(knockdown resistance，简称kdr)有关。对钠离子通道部分基因测序结果的分析表明，供试烟夜蛾抗性种群和敏感种群钠离子通道的核苷酸序列同源性为89.62％，而所编码的氨基酸序列同源性为100％。钠离子通道ⅡS6片段1014同源位点上，二者的氨基酸皆为目前所知的所有昆虫敏感种群中所具有的保守Leu残基，而未发现所知昆虫抗性种群中存在的保守Leu(CTT)→Phe(TTT)点突变，这表明烟夜蛾抗性种群对拟除虫菊酯的抗药性机制可能与kdr无关。所测定的甜菜夜蛾自然种群核苷酸序列与烟夜蛾抗性、敏感种群间的同源性分别为89.62％和98.91％，所编码的氨基酸序列与烟夜蛾两种种群的同源性均为98.36％。在甜菜夜蛾自然种群的钠离子通道ⅡS6的1014同源位点上，其氨基酸是Phe(TTT)，而不是所有已知昆虫敏感种群中的保守Leu残基，且这一位点的变化与抗性家蝇(Musca domestica)中存在的点突变完全相同[Leu(CTT)→Phe(TTT)]，说明甜菜夜蛾自然种群的钠离子通道基因序列在ⅡS6的1014同源位点上发生了突变，即该自然种群对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性机制与kdr可能是有关的。对烟夜蛾抗性、敏感种群和甜菜夜蛾自然种群与其他昆虫钠离子通道ⅡS6的核苷酸序列同源性分析发现，鳞翅目昆虫之间钠离子通道ⅡS6片段核苷酸序列的同源性都在88％以上，而鳞翅目昆虫与双翅目的果蝇Pa。11 S6的核昔酸序列同源性在 80％左右，与蜚蠕目的德国小螨（Blattellagsrmanica）敏感种群的同源性仅70＊左右，双翅目的果蝇Pa。与蜚蛾目的德国小镰敏感种群的同源性也仅70％左右。这表明同目昆虫钠离于通道11 S6片段的核昔酸序列同源性较高，而不同目的同源性较低。对烟夜蛾（抗性、敏感种群）和甜菜夜蛾自然种群与其他不同昆虫钠离子通道＊ S6片段氨基酸序列同源性比较发现，烟夜蛾敏感种群钠离于通道＊ S6的氨基酸序列与 Para、CPB、PA－HL． CoPPer和 Hpki等敏感种群的同源性皆为 100忆山此可知，钠离子通道＊ S6的氨基酸序列在昆虫敏感种群中是高度保守的，这为抗性种群突变位点的比较鉴定提供了非常便利的条件。研究结果还表明，烟夜蛾（抗性、敏感种群）和甜菜夜蛾自然种群钠离子通道 11 S6的氨基酸序列与 p6一的同源性分别为 100％和 96．43见而与 RS’x’’的同源性分别为 60．71＊和 64．28儿这两种昆虫钠离于通道 11S6的氨基酸序列与pa。的同源性皆远大于与flstTI的同源性这一事实说明，所扩增的序列都是与尸a。同源的。在分子水平上对烟夜蛾和甜菜夜蛾自然种群对拟除虫菊酯类杀虫剂＿的抗性机制的这项研究，为抗性预测和抗性治理提供了理论依据。

全文目录

1 文献综述  8-25
  1．1 昆虫抗药性发展概况  8
  1．2 昆虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性概况  8-10
  1．3 昆虫抗药性的形成  10-11
  1．4 昆虫抗药性的生理生化机制  11-14
  1．5 击倒抗性概述  14-15
  1．6 击倒抗性机制学说  15-25
2 引言  25-26
3 材料与方法  26-34
  3．1 供试昆虫  26
  3．2 基因组DNA的提取  26-28
  3．3 PCR扩增  28-29
  3．4 PCR产物检测  29
  3．5 PCR产物的纯化  29-30
  3．6 PCR产物的克隆和序列测定  30-34
4 结果与分析  34-42
  4．1 PCR所获得的产物  34-35
  4．2 PCR产物克隆的鉴定结果  35
  4．3 钠离子通道部分序列测定及分析  35-37
  4．4 不同昆虫钠离子通道ⅡS6核苷酸序列同源性分析  37-39
  4．5 不同昆虫钠离子通道ⅡS6片段氨基酸序列同源性分析  39-40
  4．6 几种不同鳞翅目昆虫同源位点上的内含子序列同源性分析  40-42
5 结论与讨论  42-45
  5．1 主要结论  42-43
  5．2 讨论  43-45
参考文献  45-49
英文摘要  49-50

烟夜蛾（Helicoverpa assulta）与甜菜夜蛾（Spodoptera exigua）钠离子通道基因片段的克隆和测序

内容摘要

全文目录

相似论文