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地黄多糖、车前子多糖、淫羊藿多糖及菟丝子多糖对成体大鼠肝脏干细胞生长影响的研究

作　者: 余文景
导　师: 杨松涛
学　校: 成都中医药大学
专　业: 中医骨伤科学
关键词: 地黄多糖车前子多糖淫羊藿多糖莬丝子多糖干细胞肝肾同源
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：通过观察同归肝肾经的四种中药的水溶性成分：地黄多糖、车前子多糖、淫羊藿多糖及菟丝子多糖对成体大鼠肝脏干细胞生长、分化情况的影响,从而更好地理解传统中药学归经理论,并验证“肝肾同源”学说是否以药理学为基础。方法：将喂养含3’-甲基二甲胺基偶氮苯(3’-Me-DAB)饲料4周的SD大鼠肝脏,通过灌注消化、梯度离心等方法制备成体大鼠肝脏干细胞。通过分离纯化、传代增殖、倒置显微镜下观察细胞形态和生长情况。研究不同浓度的地黄多糖、车前子多糖、淫羊藿多糖及菟丝子多糖对肝脏干细胞的生长,增殖及其分化情况的影响。用四氮唑盐法(MTT比色法)监测肝脏干细胞的生长活性,RT-PCR法检测经中药有效成分诱导后成体大鼠肝脏干细胞的HNF4a mRNA的表达情况。结果：MTT比色法结果显示：淫羊藿多糖、菟丝子多糖在特定的浓度下能提高肝脏干细胞活性,促进细胞增殖；地黄多糖、车前子多糖在特定浓度区间内不能促进细胞生长及增值。RT-PCR结果显示：经特定浓度下的淫羊藿多糖、菟丝子多糖诱导后,细胞的HNF4a mRNA表达明显增强。结论：(1)特定浓度下淫羊藿多糖、菟丝子多糖可促进成体大鼠肝脏干细胞的增值。在一定浓度区间内地黄多糖、车前子多糖对肝脏干细胞的增值无影响。提示性寒凉的“中药多糖”对细胞的生长和代谢无明显的促进作用。(2)经淫羊藿多糖、菟丝子多糖环境诱导后,细胞的HNF4a mRNA表达明显增加,提示在性温热的“中药多糖”的诱导下,肝脏干细胞生长活性增强的同时,其向肝脏细胞的分化趋势也十分明显。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-10
第一部分地黄多糖、车前子多糖、淫羊藿多糖及菟丝子多糖对大鼠肝脏干细胞生长活性的影响  10-20
  前言  10-11
  1.材料与方法  11-16
    1.1 材料  11-13
      1.1.1 成体大鼠肝脏干细胞  11
      1.1.2 中药多糖  11
      1.1.3 主要试剂  11-12
      1.1.4 主要实验试剂的配置  12-13
      1.1.5 主要仪器  13
    1.2 实验地点  13-14
    1.3 成体大鼠肝脏干细胞的体外分离及培养  14-15
    1.4 MTT比色法  15-16
  2.结果  16-20
    2.1 MTT比色法试验中细胞形态学观察  16-17
    2.2 统计分析结果  17-20
    2.3 四种中药多糖成分各浓度梯度对细胞增值率的影响  20
第二部分淫羊藿多糖、菟丝子多糖环境下大鼠肝脏干细胞向肝细胞分化过程中HNF4a mRNA表达的观察  20-27
  前言  20-21
  1.材料与方法  21-26
    1.1 淫羊藿多糖、菟丝子多糖诱导大鼠肝脏干细胞  21-22
    1.2 主要试剂  22
    1.3 主要实验试剂的配置  22-23
    1.4 主要仪器  23-24
    1.5 实验地点  24
    1.6 细胞总RNA提取  24-25
    1.7 一步法RT-PCR  25-26
  2 基因表达情况  26-27
    2.1 总RNA抽提结果  26
    2.2 HNF4a的RT-PCR结果  26-27
第三部分讨论  27-38
  1."肝肾同源"学说的理论研究  27-28
  2.四种中药多糖成分研究现状  28-30
  3.MTT比色法及RT-PCR实验结果讨论  30-31
  4.关于本次实验方法学的讨论  31-33
  参考文献  33-38
第四部分文献综述  38-48
  1."肝肾同源"学说的理论溯源  38-40
  2."肝肾同源"理论的现代实验研究  40-42
  3."肝肾同源"学说的临床疗效观察  42-44
  参考文献  44-48
致谢  48-49
在读期间公开发表的学术论文、专著及科研成果  49-50

地黄多糖、车前子多糖、淫羊藿多糖及菟丝子多糖对成体大鼠肝脏干细胞生长影响的研究

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