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川芎含药血清对H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型细胞活性影响

作　者: 白春颖
导　师: 周亚滨
学　校: 黑龙江中医药大学
专　业: 中医内科学
关键词: 人脐静脉内皮细胞川芎心绞痛不稳定型
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的:通过观察养心汤中臣药川芎不同浓度的含药血清对过氧化氢（H₂O₂）诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型细胞活性的影响,探讨可能的作用机制,进一步研究养心汤防治不稳定型心绞痛的作用机制,为研发防治UA的新药奠定基础。方法:采用含药血清制备的方法,将20只Wistar大鼠随机分为2组,分别为川芎组和空白组,川芎组给予川芎水煎剂灌胃,空白组给予等剂量生理盐水,每日灌胃给药2次,连续给药1周,于末次给药后1h心脏取血,分离血清,配制含药血清培养液。采用体外细胞培养的方法,将冻存HUVEC复苏、培养、并且传代。待细胞状态稳定时左右,将细胞消化、收集、计数,以每孔2×104cells接种于96孔培养板,分为5组,分为H₂O₂模型组,空白血清组,川芎含药血清2%组,川芎含药血清4%组,川芎含药血清6%组,每组6个附孔。川芎含药血清各组用不同浓度的川芎含药血清干预24h,空白血清组和H2O2模型组用空白血清培养液培养24小时。再用浓度100μmol/L的H2O2干预人脐静脉内皮细胞2h（除空白血清组除外）,复制氧化损伤的细胞模型。采用倒置荧光数字成像显微镜下观察细胞形态变化,采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力。结果:1、形态学变化:空白血清组细胞生长良好,排列成单层铺路石样。H2O2损伤模型组细胞损伤明显,而川芎含药血清各组细胞受损情况均有明显改善,且浓度越高,细胞损伤程度越轻。2、MTT结果显示:H2O2模型组细胞OD值明显降低,与空白血清组相比差异具有有统计学意义（p<0.01）。2%,4%,6%川芎含药血清各组细胞的OD值均比H2O2模型组明显升高,差异具有统计学意义（p<0.01）。其组间比较也具有统计学意义（p<0.01）,且存在浓度依赖性。2%,4%,6%川芎含药血清各组细胞的增殖率均明显升高,与H2O2模型组相比差异有统计学意义（p<0.01）。其组间比较也具有统计学意义（p<0.01）,且存在成浓度依赖性。结论:养心汤中臣药川芎含药血清通过其抗氧化的作用改善H2O2损伤内皮细胞的形态学变化,促进其损伤的内皮细胞增殖,提高细胞的活性,从而达到保护作用,这可能是养心汤防治不稳定心绞痛作用机制之一。

全文目录

缩略语表  5-6
中文摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-11
文献综述  11-30
  一、冠心病不稳定心绞痛的认识及研究进展  11-26
    (一) 祖国医学对不稳定心绞痛的认识及研究进展  11-19
    (二) 现代医学对不稳定型心绞痛的认识及研究进展  19-26
  二中药血清药理学的研究进展  26-27
  三细胞培养的研究进展  27-30
材料与方法  30-35
  一、实验材料  30-31
    （一）实验细胞  30
    （二）实验动物  30
    （三）实验药物  30
    （四）主要试剂  30
    （五）主要仪器  30-31
  二、实验方法  31-34
    （一）主要试剂配制  31
    （二）细胞复苏  31-32
    （三）细胞培养及传代  32
    （四）川芎含药血清制备  32-33
    （五）模型制备及分组  33
    （六）观测指标及方法  33-34
  三、统计方法  34-35
结果  35-38
  一、含药血清观察  35
  二、培养的正常人脐静脉内皮细胞形态学观察  35
  三、川芎含药血清对 H_20_2损伤人脐静脉内皮细胞的影响  35-38
讨论  38-47
  一、关于内皮损伤模型  38-39
  二、关于益气养血，养心安神法确立的依据  39-40
  三、关于养心汤的方药分析  40-42
  四、关于药物血清的制备  42-43
  五、关于 MTT 法  43-44
  六、关于川芎含药血清对 H_20_2损伤内皮细胞活性的影响  44-45
  七、展望  45-47
结论  47-48
致谢  48-49
参考文献  49-56
附图  56-57
攻读硕士学位期间发表的论文  57-58
个人简历  58-59
中文详细摘要  59-60

川芎含药血清对H_2O_2诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤模型细胞活性影响

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