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水稻种子cDNA微阵列的分析及相关基因的表达与功能研究

作　者: 王霞
导　师: 张宪省
学　校: 山东农业大学
专　业: 植物学
关键词: 水稻 cDNA微阵列 EST 基因表达遗传转化
分类号: S511.01
类　型: 硕士论文
年　份: 2002年
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内容摘要

以水稻(Oryza sativa)“中花11”授粉后9-12天的种子为材料构建cDNA文库，通过微阵列技术和表达序列标签法对文库进行筛选和分析，分离到与水稻种子发育过程中表达基因(种子贮藏蛋白基因和胚胎发生及发育基因)具较高同源性的克隆157个，功能未知的克隆115个，向GenBank提交EST 270个，注册基因2个。在此基础上对分离到的基因RS2和RS6进行了表达与功能研究。Northern杂交结果表明，基因RS2主要在授粉后10天种子的胚及授粉后10天、15天、20天种子的胚乳中表达，而在根、叶等营养器官中表达量较低；基因RS6只在授粉后5天的种子、授粉后10天种子的胚及授粉后10天、15天、20天种子的胚乳中表达。分别构建基因RS2和RS6的反义表达载体pCAMBIA-RS2和pCAMBIA-RS6，进行了农杆菌介导的水稻愈伤组织遗传转化。目前，RS2和RS6均已获得一定数量的转基因植株，基因的功能鉴定工作正在进行之中。

全文目录

英文缩略表  5-6
中文摘要  6-7
1 引言  7-12
  1．1 水稻种子的发育  7-8
  1．2 功能基因组学研究  8-11
    1．2．1 基于微点阵的基因功能分析  9
    1．2．2 基因产物蛋白质的表达分析  9-10
    1．2．3 利用正向和反向遗传学技术研究植物基因功能  10
    1．2．4 生物信息学在功能基因组学中的应用  10-11
  1．3 课题研究思路  11-12
2 材料与方法  12-29
  2．1 实验材料  12
    2．1．1 植物材料  12
    2．1．2 菌株和质粒  12
    2．1．3 酶和试剂  12
    2．1．4 PCR引物  12
  2．2 实验方法  12-29
    2．2．1 种子cDNA文库的构建  12-13
    2．2．2 cDNA文库微阵列分析  13-16
    2．2．3 RS2与RS6的表达分析  16-20
    2．2．4 RS6全序列的获得  20-23
    2．2．5 反义表达载体的构建  23
    2．2．6 农杆菌介导的水稻转化  23-29
3 结果与分析  29-40
  3．1 cDNA文库的构建  29
  3．2 cDNA克隆的筛选  29-31
  3．3 EST序列的比较分析  31
  3．4 目的基因的确定  31-32
    3．4．1 RS2的EST比较分析  31-32
    3．4．2 RS6的EST比较分析  32
  3．5 RS2和RS6的全序列获得  32-34
    3．5．1 RS2的全序列获得  32-33
    3．5．2 RS6的全序列获得  33-34
  3．6 RS2和RS6的表达与功能分析  34-40
    3．6．1 RS2和RS6的表达分析  34-37
    3．6．2 RS2和RS6的功能分析  37-38
    3．6．3 RS2和RS6的转基因植株鉴定  38-40
4 讨论  40-44
  4．1 EST比较分析  40
  4．2 目的基因的确定  40-41
  4．3 RS2和RS6全序列的获得  41
  4．4 RS2和RS6的表达分析  41-42
  4．5 RS2和RS6的功能分析  42-44
5 结论  44-45
参考文献  45-51
英文摘要  51-52
附录  52-68
致谢  68

水稻种子cDNA微阵列的分析及相关基因的表达与功能研究

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