学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

MicroRNA在非小细胞肺癌耐药细胞株A549/DDP中表达及作用机制的研究

作　者: 陆晓
导　师: 束永前
学　校: 南京医科大学
专　业: 肿瘤学
关键词: 非小细胞肺癌 顺铂 miR-21 PTEN Bcl-2
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 206次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


背景和目的:microRNA (miRNA)是在真核生物中发现的一类小分子非编码RNA,在转录后水平调节基因表达。研究表明,miRNA作为类似癌基因和抑癌基因作用参与细胞增殖、凋亡和分化的调控,在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的生物学作用,且可能与肿瘤的耐药性密切相关。顺铂是非小细胞肺癌(NSCLC)化疗的一线药物,但其获得性耐药制约了其疗效的发挥。本实验通过miRNA表达谱芯片技术,检测顺铂耐药的NSCLC细胞株与敏感株中miRNA表达的差异,筛选出与NSCLC顺铂耐药相关的miRNAs表达谱。并进一步探讨miRNA在NSCLC顺铂耐药中的作用机制,进而为miRNA作为NSCLC顺铂耐药诊断和预后的标志物及基于miRNA的NSCLC逆转顺铂耐药治疗策略提供理论依据。方法:(1)MTT法检测A549/DDP相对于其亲本细胞A549对顺铂的耐药性和耐药倍数;(2)分别提取两种细胞的总RNA,并进行质检;microRNA芯片检测NSCLC细胞株A549及其对应的顺铂耐药株A549/DDP中miRNA表达差异;(3)设计并合成miRNA特异性引物,采用real time PCR验证芯片结果。(4)探讨miR-21对肺癌细胞株顺铂敏感性的影响:miRNA前体转染A549细胞株,anti-miRNA寡聚核苷酸转染A549/DDP细胞株,分别使miR-21在A549中表达增高,而在A549/DDP中表达降低,同时分别设立阴性对照组及空白对照组,MTT法测定转染后的两株细胞对顺铂的药物敏感性。(5)转染24h后,提取细胞总RNA,real time PCR测定转染后A549和A549/DDP中mir-21的表达量(。6)运用TargetScan、miRanda、PicTar软件预测miR-21可能调控的靶基因(。7)western blot验证miR-21的靶基因:转染48h后,提取细胞总蛋白,western blot的方法检测Bcl-2蛋白和PTEN蛋白的表达。结果:(1)顺铂对A549和A549 /DDP细胞的IC50值分别为7.47μmol /L和137.32μmol /L,两者之间差异有统计学意义(P<0.01),耐药倍数为18.38倍。(2)从A549和A549/DDP中提取到的总RNA纯度高,完整性好。microRNA芯片结果显示耐药株A549/DDP与亲本细胞株A549比较有34条有差异表达的miRNA(差异比值﹥1.5倍或﹤0.67倍, P<0.05);(3)real time PCR的结果进一步证实miR-21,miR-31,miR-374在A549/DDP中显著上调,而miR-378,miR-886-5p,miR-886-3p,miR-520c-3p在A549/DDP中显著下调。(4)体外药物敏感试验中发现,反义抑制mir-21使细胞对顺铂的敏感性明显增加,实验组较对照组IC50降低了23%(P<0.05);而使mir-21过表达可导致细胞对顺铂产生耐药性,实验组较对照组IC50增加了103%(P<0.05)。(5)转染24h后, real time PCR测定A549实验组中mir-21的表达比对照组增加了16倍(P<0.01),A549/DDP实验组中mir-21的表达比对照组减少了20倍(P<0.01)。(6)在转染miR-21反义寡核苷酸的A549/DDP细胞中,相对于未转染组和对照组,观察到凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下调,PTEN表达上调;在转染miR-21前体的A549细胞中,相对于未转染组和对照组,观察到凋亡抑制蛋白Bcl-2表达上调,而PTEN表达下调。结论:(1)A549/DDP与A549细胞株miRNA的表达谱存在着差异,提示miRNA可能参与NSCLC顺铂耐药;(2)体外药物敏感试验中发现,反义抑制miR-21使细胞对顺铂的敏感性明显增加,减轻了肿瘤耐药;而使miR-21过表达可导致细胞对顺铂产生耐药性。(3)miR-21可能通过调控Bcl-2和PTEN的表达介导了NSCLC细胞的顺铂耐药。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-9
前言  9-11
材料和方法  11-26
结果  26-36
分析与讨论  36-40
结论  40-42
参考文献  42-46
综述  46-60
  参考文献  54-60
附录  60-61
在读期间发表的文章  61-62
致谢  62

相似论文

  1. CADPE抗肿瘤作用及对胃癌细胞凋亡的影响,R735.2
  2. 肺癌患者癌组织和血浆p16基因甲基化的检测及去甲基化肺癌细胞生物学行为和p16基因转录的研究,R734.2
  3. 非小细胞肺癌组织中金属硫蛋白及基质金属蛋白酶-2的表达及相关性研究,R734.2
  4. sCD40L对白血病HL-60细胞株生物学行为的影响及机制,R733.7
  5. PTEN、Caspase-7在胃癌与癌前病变中表达及意义,R735.2
  6. RNA干扰抑制ERCC1对非小细胞肺癌化疗敏感性的影响（体外实验）,R734.2
  7. 非小细胞肺癌CVATS肺叶切除133例分析,R734.2
  8. 培美曲塞联合顺铂一线治疗晚期肺腺癌临床观察,R734.2
  9. 培美曲塞治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察,R734.2
  10. 蟾蜍灵对血管内皮细胞EAhy926增殖和诱导凋亡的研究,R285
  11. 大承气汤对多器官功能障碍综合征大鼠小肠平滑肌细胞Bcl-2和Bax表达的影响,R285.5
  12. 丁香胃灵合剂对慢性萎缩性胃炎大鼠胃泌素（GAS）水平及Bc1-2蛋白表达的影响,R285.5
  13. 丹参酮ⅡA微乳抗H22小鼠肝癌的研究,R285.5
  14. GM-CSF对糖尿病大鼠创面愈合过程中BCL-2表达水平的影响,R644
  15. 丁苯酞预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用,R743.33
  16. 趋化因子受体CCR5在非小细胞肺癌中的表达及意义,R734.2
  17. NF-κB抑制剂PDTC（吡咯烷二硫代氨基甲酸盐）对非小细胞肺癌ASPP1、ASPP2表达的影响,R734.2
  18. p53、PCNA和PTEN在胃癌组织中的表达及其临床意义研究,R735.2
  19. 顺铂对小鼠肺癌细胞中P-糖蛋白表达的影响,R734.2
  20. 非小细胞肺癌患者外周血Survivin mRNA联合CK19 mRNA检测的临床研究,R734.2
  21. 重组人血管内皮抑制素对人肺腺癌A549细胞ERCC1基因表达的影响,R734.2

中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
© 2012 www.xueweilunwen.com