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氨基甾体小分子对K562和Meg-01慢粒白血病细胞系的作用

作　者: 甄焕英
导　师: 何群
学　校: 中南大学
专　业: 生理学
关键词: 白血病细胞 氨基甾体 增殖分化 钙离子 bcr/abl融合基因
分类号: R733.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 37次
引　用: 1次
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内容摘要


目的:观察氨基甾体类化合物对人慢性粒细胞白血病K562细胞系和MEG-01细胞系的抑制增殖和诱导分化作用,并进一步探讨其作用机制。方法:采用MTT实验来观察氨基甾体类化合物对K562细胞及MEG-01细胞的抑制增殖能力;采用Wright染色,细胞表面CD71、CD41表面标记物的检测来观察氨基甾体类化合物对K562及MEG-01细胞系的诱导分化作用;为了进一步了解氨基甾体类化合物对K562细胞及MEG-01细胞作用的机制,采用荧光分光光度计检测K562细胞及MEG-01细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的变化,采用RT-PCR实验观察K562及MEG-01细胞内bcr/abl融合基因的变化。结果:氨基甾体类化合物对K562细胞及MEG-01细胞增殖能力和分化能力的影响1.增殖方面:MTT结果显示,终浓度为10-5mol/L的5种氨基甾体类化合物作用于K562细胞及MEG-01细胞第5d,5种氨基甾体类化合物对K562细胞及MEG-01细胞的增殖均有不同程度的抑制作用,对K562细胞生长抑制率（GIR）分别为Z-30（62.18±4.72）%,Z-31（35.25±2.16）%,Z-32（42.86±7.32）%,Z-33（64.71±1.24）%,Z-34（73.95±8.82）%。对MEG-01细胞的生长抑制率（GIR）分别为Z-30（43.24±5.61）%,Z-31（45.65±3.24）%,Z-32（60.81±2.57）%,Z-33（66.22±6.26）%,Z-34（72.97±7.28）%。2.分化方面:终浓度为10-5mol/L的5种氨基甾体（Z-30、31、32、33、34）作用于K562细胞及MEG-01细胞第5d Wright染色,镜下观察发现K562细胞核浆比例减少,有核切迹,核染色质浓集变粗,胞质增多,浅染,核周胞质出现淡染区;MEG-01细胞则表现为核浆比例变小,胞核呈不规则状,核染色质浓集变粗,胞质增多,浅染,核周胞质出现淡染区。流式细胞仪分析显示:终浓度为10-6mol/L的5种氨基甾体（Z-30、31、32、33、34）作用于K562细胞第5d,细胞膜上CD71表面标记表达阳性率分别为91.63%、91.07%、85.16%、80.85%、75.51%;终浓度为10-6mol/L的5种氨基甾体（Z-30、31、32、33、34）作用于MEG-01细胞第5d,细胞膜上CD41表面标记表达阳性率分别为74.7%、64.5%、64.58%、54.96%、59.65%。3.5种氨基甾体对K562细胞及MEG-01细胞内[Ca2+]的影响利用荧光分光光度计检测发现:经终浓度为10-6mol/L的5种氨基甾体（Z-30、31、32、33、34）处理K562细胞0.5h,处理MEG-01细胞1h后,细胞内游离[Ca2+]的荧光强度有所下降。4.氨基甾体对K562细胞及MEG-01细胞bcr/abl融合基因的影响:终浓度为10-6mol/L的5种氨基甾体类化合物作用于K562细胞及MEG-01细胞第5d,提取其RNA进行逆转录及扩增,与对照组相比,bcr/abl融合基因表达产量降低。结论:1 5种氨基甾体类化合物均能有效地抑制K562细胞及MEG-01细胞的增殖,并呈浓度依赖性,但两种细胞对不同的氨基甾体类化合物有不同的敏感性。2所有的氨基甾体类化合物均能有效地诱导K562细胞系向红系分化,诱导MEG-01细胞向巨核系分化,但不同的氨基甾体类化合物诱导K562细胞及MEG-01细胞分化的程度不同。3 5种氨基甾体作用于K562细胞和MEG-01细胞一段时间后,均能使K562及MEG-01细胞内[Ca2+]下降,这可能与其阻断了钙通道有关,且细胞内[Ca2+]的降低可能与氨基甾体对K562及MEG-01细胞产生抑制增殖和诱导分化的作用机制有关。4 bcr/abl融合基因5种氨基甾体作用于K562细胞及MEG-01细胞5d后,均可下调K562细胞及MEG-01细胞内的bcr/abl融合基因,但不同的氨基甾体化合物下调MEG-01细胞内的bcr/abl融合基因的程度不同。

全文目录


摘要  5-8
ABSTRACT  8-12
前言  12-15
材料和方法  15-23
  2.1 材料  15-16
  2.2 细胞系  16
  2.3 实验分组  16
  2.4 检测指标  16-22
  2.5 统计学处理  22-23
实验结果  23-28
  3.1 白血病细胞系的生长状况  23
  3.2 5种氨基甾体类化合物对白血病细胞MTT值的影响  23-24
  3.3 5种氨基甾体化合物对白血病细胞形态的影响  24-25
  3.4 5种氨基甾体化合物对白血病细胞膜表面标记表达的检测  25
  3.5 5种氨基甾体化合物对白血病细胞内游离[CA~(2+)]的影响  25-26
  3.6 5种氨基甾体化合物对K562细胞BCR/ABL融合基因的影响  26-28
讨论  28-32
结论  32-33
附图  33-40
综述 钙离子通道概述  40-48
参考文献  48-55
致谢  55-56
攻读硕士期间的主要研究成果  56

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病
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