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内侧颞叶癫痫海马蛋白质组学的改变

作　者: 柳固
导　师: 尹飞
学　校: 中南大学
专　业: 儿科学
关键词: 内侧颞叶癫痫人类海马蛋白质组
分类号: R742.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

研究背景内侧颞叶癫痫(Mesial Temporal Lobe Epilepsy,MTLE)是难治性癫痫的主要类型,其常见的病理改变是海马硬化。MTLE的发病机制至今尚未完全阐明,目前认为其可能与苔藓纤维发芽、神经递质及其受体改变、细胞凋亡、神经胶质细胞增生等相关。蛋白质组学技术是近年来出现的一种研究特定细胞、组织或完整生物体所表达的全部蛋白质及其活动规律的新兴学科。这种技术的出现为在蛋白质整体水平上探讨疾病的发生发展机制提供了可能。目的建立内侧颞叶癫痫患者海马组织蛋白质双向凝胶电泳图谱,初步分析海马蛋白质的表达,以了解MTLE的发病机制,寻找新的治疗靶点。方法研究对象分为两组,其中癫痫组为2007年07月至2008年04月期间中南大学湘雅医院神经外科收治的5例MTLE患者,收集其手术切除的病变海马组织。对照组为3例湘雅医院病理科尸解获得的海马组织。提取两组标本蛋白后,通过固相pH梯度(Immobile pHgradient,IPG)二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(Two-dimensionalpolyacrylamide gel electrophoresis,2D-PAGE)技术分离蛋白质,考马斯亮蓝染色,Imagescanner扫描仪以及LabScan扫描软件对凝胶进行扫描获取图像。利用图像分析软件PDQuest,以对照组的2-DE凝胶为参考胶,将癫痫组的2-DE凝胶与之进行比较分析,寻找两组海马组织蛋白质谱的异常变化斑点。然后筛选出差异明显的蛋白质斑点,切取后进行基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱(Matrix-assistedlaser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析,获得肽质量指纹图谱(Peptide massfingerprinting,PMF),运用生物信息学技术获取蛋白的基本信息,确定差异蛋白质,并对所鉴定的差异蛋白质进行功能归类分析。结果对照组海马组织分离获得蛋白质斑点834±56个,癫痫组海马组织分离获得蛋白质斑点856±40个。比较发现,有54个蛋白质点存在着量或质的差别。其中,有11个蛋白质点仅在对照组表达,有3个蛋白质点仅在癫痫组表达;与对照组海马蛋白质点表达量相比,癫痫组海马有30个蛋白质点表达量有2倍以上的上调,有10个蛋白质点表达量有2倍以上的下调。对差异明显的41个蛋白质点进行MALDI-TOF-MS分析,获得了41张PMF。进入数据库进行搜索后匹配到蛋白质的点有34个。将这些鉴定的差异蛋白质进行功能分析归类,发现它们分别属于代谢酶、细胞骨架蛋白、热休克蛋白、抗氧化蛋白、信号转导蛋白、蛋白酶体相关蛋白等。结论本实验成功建立了对照组与癫痫组海马组织的双向凝胶电泳图谱,发现了一系列与MTLE相关的差异蛋白质点。这些差异蛋白质可能与MTLE的发生发展密切相关。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-9
英文缩略语简表  9-10
第一章前言  10-11
第二章材料与方法  11-23
  2.1 材料  11-17
  2.2 方法  17-23
第三章结果  23-32
  3.1 癫痫组与正常组海马组织2-DE图谱比较  23-25
  3.2 部分差异蛋白质点的质谱鉴定结果  25-32
第四章讨论  32-38
第五章结论  38-39
参考文献  39-44
综述  44-55
致谢  55

内侧颞叶癫痫海马蛋白质组学的改变

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