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基于壳聚糖修饰纳米羟基磷灰石基因载体的转染率研究

作　者: 毛岳峰
导　师: 朱晒红
学　校: 中南大学
专　业: 外科学
关键词: 羟基磷灰石壳聚糖分散稳定性基因载体转染率
分类号: R318.08
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:评估用壳聚糖修饰后纳米羟基磷灰石基因载体的分散稳定性能和转染率,为提高纳米羟基磷灰石基因载体分散稳定性能和转染率奠定理论基础。方法:1、HA纳米颗粒胶体液中加入0.0125%wt的壳聚糖弱酸溶液,以修饰HA纳米颗粒;2、测定壳聚糖修饰后的HA纳米颗粒溶液pH值,并测定修饰后的HA纳米颗粒在不同pH值环境下的Zeta电位,评估HA表面电荷情况;3、透射电镜下观察壳聚糖修饰后HA纳米颗粒的形貌及粒径,用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分析修饰后的HA纳米颗粒携带、保护DNA的能力,及HA-CS/DNA解离的方式;4、用pEGFP-N1质粒转染HepG2肝癌细胞、Hela宫颈癌细胞和SW620结肠癌细胞,评估壳聚糖修饰后的纳米HA基因载体转染率。结果:经过壳聚糖修饰的HA纳米颗粒PH值为4.14,在酸性、中性环境下Zeta电位均为正值,碱性环境下为负值,且在中性条件下可有效的结合DNA;透射电镜观察HA和CS纳米颗粒平均粒径约为20～90nm,部分HA颗粒周围有CS颗粒包绕,部分团聚,分散性较好;修饰后的HA纳米颗粒负载量较未经修饰的HA高,且有携带、保护DNA的能力。结合到HA-CS纳米颗粒上的DNA能用PB溶液洗脱下来;经过壳聚糖表面修饰的HA纳米颗粒的转染率明显好于没经修饰的HA纳米颗粒及CS纳米颗粒。经过壳聚糖表面修饰的HA纳米颗粒对三种癌细胞转染率无明显区别。结论:经过壳聚糖修饰的HA基因载体分散性更好,Zeta电位显著提高,其基因负载量与转染率均提高。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-8
符号说明  8-9
前言  9-10
第一章实验一 pEGFP-N1质粒的转化、抽提及鉴定  10-17
  1.1 材料与方法  10-15
    1.1.1 材料  10-11
    1.1.2 方法  11-15
  1.2 结果  15-16
    1.2.1 质粒的转化  15
    1.2.2 质粒抽提产物的鉴定  15-16
  1.3 结论  16-17
第二章实验二 CS修饰HA纳米颗粒对携带、保护DNA的能力及转染效果的影响  17-35
  2.1 材料与方法  17-21
    2.1.1 材料  17-19
    2.1.2 方法  19-21
  2.2 结果  21-30
    2.2.1 HA-CS纳米颗粒胶体液的制备与TEM检测  21-22
    2.2.2 CS修饰后HA纳米颗粒胶体液的pH值及耐碱能力  22
    2.2.3 CS对HA纳米颗粒的修饰  22-24
    2.2.4 DNA与CS修饰后HA纳米颗粒的解离实验  24-25
    2.2.5 CS修饰后HA纳米颗粒对DNA的保护实验  25-26
    2.2.6 CS修饰后HA纳米颗粒介导的体外转染实验  26-30
  2.3 讨论  30-34
  2.4 结论  34-35
参考文献  35-38
综述  38-45
致谢  45-46
攻读学位期间的研究成果  46

基于壳聚糖修饰纳米羟基磷灰石基因载体的转染率研究

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