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牛磺酸和左旋肉毒碱协同抑制血管平滑肌细胞增殖和成骨分化

作　者: 张瑞娟
导　师: 罗湘杭
学　校: 中南大学
专　业: 代谢内分泌学
关键词: 牛磺酸左旋肉毒碱血管平滑肌细胞增殖成骨分化
分类号: R543.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：本实验旨在研究牛磺酸(taurine, TAU)和左旋肉毒碱(L-carnitine,LC)对调节血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)增殖和成骨分化是否具有协同作用,并探讨其可能的作用机制。方法：应用3H-掺入法检测血管平滑肌细胞增殖。碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase, ALP)活性用对硝基苯酚法检测,钙沉积量用原子吸收光谱测定法检测,研究牛磺酸和左旋肉毒对VSMCs成骨分化的影响。[3H]牛磺酸掺入法检测VSMCs牛磺酸摄取情况。采用Western blot检测牛磺酸转运体在VSMCs的表达。用小分子RNA干扰技术(shRNAs)抑制牛磺酸转运体的表达,以观察对左旋肉毒碱和牛磺酸抗有丝分裂和抗成骨分化作用的影响。结果：(1)牛磺酸对VSMCs增殖、β-甘油磷酸钠(p-GP)诱导的成骨分化具有抑制作用。(2)左旋肉毒碱仅抑制VSMCs增殖,对其成骨分化无影响。(3)牛磺酸和左旋肉毒对VSMCs增殖、P-GP诱导的成骨分化具有协同抑制作用。(4)左旋肉毒碱上调VSMCs牛磺酸摄取和转运体的表达。(5)shRNA转染沉默牛磺酸转运体可消除左旋肉毒碱和牛磺酸对VSMCs的协同作用。结论：左旋肉毒碱可促进VSMCs牛磺酸的摄取和牛磺酸转运体表达上调,协同牛磺酸抑制VSMCs的增殖和成骨分化。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
前言  10-11
材料与方法  11-16
  一、材料  11
    1. 仪器  11
    2. 试剂  11
    3. 动物  11
  二、方法  11-16
    1. 细胞培养  11-12
    2. DNA和蛋白质合成的检测  12
    3. Bradford法检测细胞总蛋白含量  12-13
    4. 碱性磷酸酶活性的测定  13
    5. 钙沉积的量化测定  13
    6. 牛磺酸摄取测定  13
    7. Western blot分析  13-14
    8. RNA干扰牛磺酸转运体  14-15
    9. 统计分析  15-16
结果  16-27
  1. 牛磺酸和左旋肉毒碱对VSMCs[~3H]胸腺嘧啶核苷和[~3H]亮氨酸掺入量的影响  16-17
  2. 牛磺酸和左旋肉毒碱对VSMCs ALP活性的影响  17-18
  3. 牛磺酸和左旋肉毒碱对VSMCs钙化的影响  18-19
  4. 左旋肉毒碱促进VSMCs牛磺酸摄取上调呈剂量和时间依赖性  19-20
  5. 左旋肉毒碱对VSMCs牛磺酸转运体蛋白表达水平的影响  20-22
  6. RNA干扰对VSMCs牛磺酸转运体蛋白表达的影响  22-23
  7. 牛磺酸转运体表达缺失对左旋肉毒碱及牛磺酸抗有丝分裂作用的影响  23-24
  8. 牛磺酸转运体表达缺失对左旋肉毒碱及牛磺酸抗成骨作用的影响  24-27
讨论  27-31
结语  31-32
参考文献  32-37
综述  37-51
  参考文献  45-51
致谢  51

牛磺酸和左旋肉毒碱协同抑制血管平滑肌细胞增殖和成骨分化

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