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肌动蛋白与RNA聚合酶Ⅱ的Rpb5，Rpb6和Rpb7亚基之间的相互作用

作　者: Djouder Zina
导　师: 曾宪录
学　校: 东北师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 核β-肌动蛋白 Rpb5 Rpb6 Rpb7 RNA聚合酶II亚基 相互作用
分类号: Q26
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


肌动蛋白是细胞骨架的组成部分,让细胞流动和行使各种生理过程。肌动蛋白是典型真核细胞中的一种古老而丰富的蛋白质,在某些类型的细胞中约占15 %,从细胞迁移到膜运输等都起着重要的作用。曾经被认为只是肌肉的一个组成部分,目前认为真核细胞中普遍存在的成分。有证据表明,肌动蛋白存在于许多种真核细胞的细胞核中,行使多种功能,包括转录,胞质运输,参与染色质和核结构的构建等。最近的体外研究表明,肌动蛋白,与转录复合体直接作用,为三个真核RNA聚合酶所参与的转录早期所必需。但它的功能目前还不清楚,它的作用仍是一个有趣的问题。在该领域需要更深入的是研究肌动蛋白如何与三种转录机器相互作用。这包括所有三个聚合酶的亚基,许多转录因子和每个聚合酶的其他结合蛋白,这可能有助于确定肌动蛋白在每个事件中真核细胞演化中,如何与基因转录复合体相互作用提供一些基本的见解。在这项研究中,我们在大肠杆菌中构建了pcDNA-HA-rpb重组质粒,表达三个聚合酶II亚基: Rpb5 , Rpb6和Rpb7,通过转染哺乳动物细胞293T,从而表达带HA标签的多肽,同时转染不带标签的β-actin。在HeLa细胞中通过免疫荧光证明了β-肌动蛋白与RNA聚合酶II亚基共定位。同时肌动蛋白与抗HA的抗体发生免疫共沉淀,表明二者在体内的相互作用。通过利用在大肠杆菌中表达和纯化的带谷胱甘肽- S -转移酶( GST)的融合蛋白Rpb5 , Rpb6和Rpb7,针对β-肌动蛋白与RNA聚合酶II亚基能否进行相互作用而作了体外的GST pull-down实验。然而,所有这三个聚合酶II亚基能在体内与肌动蛋白相互作用但不包括Rpb6;另外,我们发现核肌动蛋白可以与Rpb5和Rpb7在体外发生联系。总之,我们证明了核肌动蛋白可以与聚合酶II亚基发生联系;所述的结果表明,β-肌动蛋白与聚合酶II复合体的联系非常紧密,可能通过与Rpb5 , Rpb6和Rpb7亚基中的一个或多个进行直接的蛋白质相互作用。

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中图分类: > 生物科学 > 细胞生物学 > 细胞生物化学
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