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醋柴胡对大鼠肝细胞影响的试验研究

作　者: 刘丽娟
导　师: 赵瑞芝
学　校: 广州中医药大学
专　业: 药剂学
关键词: 醋柴胡 大鼠肝细胞膜 细胞内pH 膜通透性 膜组分 膜形态 p-糖蛋白
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的通过引经药醋柴胡水提液对大鼠肝膜通透性、细胞内pH值、膜成分、膜形态、p-糖蛋白的表达等变化的研究,从药物作用的不同环节探讨醋柴胡引经的作用的可能机理。方法以MTT法检测确定醋柴胡水提液对大鼠肝细胞试验的最佳剂量;应用流式细胞仪测定细胞内荧光强度,以确定醋柴胡对大鼠肝细胞膜通透性影响;通过荧光探针法研究醋柴胡水提液对火鼠肝细胞内pH值的变化,运用荧光分光光度计测定大鼠肝细胞内的荧光强度比以计算细胞内pH值;测定细胞膜蛋白和胆固醇含量运用自动生化分析仪,测定细胞膜磷脂含量应用薄层扫描法;观察醋柴胡水提液对大鼠肝细胞膜的形态的影响应用电子镜显微镜;醋柴胡水提液对大鼠肝细胞膜上p-糖蛋白的表达,应用流式细胞仪法。结果醋柴胡水提液对大鼠肝细胞有增殖作用,且在0.16mg/ml-4mg/ml这个浓度范围内对大鼠肝细胞的增殖作用最强,本实验选用10 mg/mL,2 mg/mL,O.4 mg/mL三个浓度组;醋柴胡对细胞膜通透性的影响表明,醋柴胡水提液对大鼠肝细胞膜通透性影响随着药物作用时间的延长,其膜的通透性逐渐增加,且药物组与空白组比较有显著差异,其p<O.01;醋柴胡水提液对细胞质内pH值影响随时间、浓度不同而不同,24h各药物剂量组细胞质中pH与空白组细胞相比有统计意义,其p<O.01;加药组囊泡膜内pH值呈现下降的趋势,药物作用18h的组囊泡膜内pH值与空白相比有统计意义,其p<O.05,但不同浓度组间无统计意义,其他各组细胞内及囊泡膜内pH值均与对照组没有显著差异;醋柴胡水提液对大鼠肝细胞组分的结果表明,药物对细胞膜组分的影响随时间、浓度不同而不同。12h各药物浓度组与24h高浓度组使膜蛋白总含量均降低,与空白组相比有统计意义,其p(O.01。24h低浓度组与48h低中浓度组使细胞膜蛋白总量增加,与空白组相比有统计意义,其p<O.01。药物作用3小时,除磷脂酰丝氨酸以外,低浓度醋柴胡使细胞膜内的鞘磷脂、磷脂酰胆碱与磷脂酰乙醇胺含量均增加,与空白组相比有统计学意义,其p<O.05;而中高浓度组使细胞膜内的鞘磷脂、磷脂酰胆碱与磷脂酰乙醇胺含量都有所下降,具有统计学上的显著差异,其p<O.05。而其它时间点药物组与空白组相比没有显著差异;醋柴胡对大鼠肝细胞膜表面形态影响不大,其中高浓度组的细胞膜表面特化部分如桥粒、微绒毛遭到轻微的破化,细胞膜表面变得比较光滑;醋柴胡对p-糖蛋白的结果表明,醋柴胡可降低p-糖蛋白在大鼠肝细胞膜上的表达,特别是中低浓度组对p-糖蛋白影响较大。结论醋柴胡水提液在O.16mg/m1-4mg/ml范围内对大鼠肝细胞有增殖作用,能增加大鼠肝细胞膜的通透性和降低大鼠肝细胞膜p-糖蛋白的表达,醋柴胡对大鼠肝细胞内pH值影响和膜形念影响不显著,醋柴胡不同浓度在不同时间点对大鼠肝细胞膜组分有着不同的影响,在药物作用早期对细胞膜脂有影响,随着药物作用时间的延长,药物对细胞膜总蛋白又有影响,其具体的影响规律及机理还有待进一步研究和探讨。以上结果提示,醋柴胡有可能通过影响细胞膜组成及表面P糖蛋白等因素影响细胞膜的通透性,进而影响药物的肝摄取。

全文目录


中文摘要  3-5
Abstract  5-10
引言  10-12
第一部分 文献研究  12-22
  1 引经药与柴胡研究进展  12-13
    1.1 引经药研究进展  12
    1.2 柴胡研究概述  12-13
  2 研究方法学进展  13-19
    2.1 细胞膜通透性的研究  13-14
    2.2 细胞内pH的研究现状  14-16
    2.3 细胞膜组成研究进展  16-18
    2.4 p-糖蛋白研究现状  18-19
  3 本课题的目的、研究内容及意义  19-22
    3.1 目的  20
    3.2 研究内容  20
    3.3 研究意义  20-22
第二部分 试验研究  22-50
  第一节 醋柴胡水提液对大鼠肝细胞增殖作用  22-25
    1 材料与方法  22-23
    2 结果与讨论  23-25
  第二节 引经药醋柴胡对大鼠肝细胞膜通透性的影响  25-29
    1 材料与仪器  25
    2 实验方法  25-26
    3 试验结果  26-27
    4 讨论  27-29
  第三节 引经药醋柴胡对大鼠肝细胞pH值的影响  29-34
    1 材料与仪器  29
    2 试验方法  29-30
    3 试验结果  30-32
    4 讨论  32-34
  第四节 引经药醋柴胡对大鼠肝细胞膜组分的影响  34-45
    1 材料与仪器  34
    2 实验方法  34-36
    3 试验结果  36-41
    4 讨论  41-45
  第五节 引经药药醋柴胡对大鼠肝细胞膜表面形态影响  45-47
    1 材料与仪器  45
    2 实验方法  45
    3 试验结果与讨论  45-47
  第六节 引经药药醋柴胡对大鼠肝细胞膜p-糖蛋白的影响  47-50
    1 材料与仪器  47
    2 实验方法  47-48
    3 试验结果  48
    4 讨论  48-50
结语  50-52
参考文献  52-59
附录  59-60
致谢  60

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