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HSP70多肽复合物的纯化及激活的DC疫苗抗胰腺癌体内外实验研究

作　者: 张晓娟
导　师: 董坚；陈明清；刘流；贾伟
学　校: 昆明医学院
专　业: 肿瘤学
关键词: 胰腺癌 HSP70多肽复合物树突状细胞抗肿瘤免疫
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 63次
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内容摘要

目的:探讨从胰腺癌肿瘤块中分离纯化热休克蛋白70-多肽复合物(heatshock protein 70-polypeptide complexes,HSP70-PCs)的方法,研究使用HSP70多肽复合物构建树突状细胞(dendritic cell,DC)多肽疫苗,观察其在体外对CTL的增殖和活化效果。并进行免疫治疗荷瘤小鼠,观察小鼠的肿瘤大小及存活期。方法:采用低渗裂解、ConA-Sepharose亲和层析及ADP-Agarose亲和层析法,从小鼠胰腺癌(MPC83)肿瘤组织中纯化HSP70-PCs,所得蛋白经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,Bradford法测定蛋白浓度,计算获得率。用提纯的HSP70-PCs激活小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),制备树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗,用MTT法检测混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte response,MLR)中HSP70-PCs致敏DC对CTL的增殖及活化效果;并观察DC诱导的肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)对肿瘤细胞的特异性杀伤活性,建立MPC83荷瘤小鼠模型,并将DC接种于荷瘤小鼠皮下,观察树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗对肿瘤生长的抑制作用及对荷瘤小鼠生存期的影响。结果:纯化蛋白经鉴定为分子量70KD的HSP70-PCs;平均1克湿重肿瘤组织中获得79.95μg的HSP70-PCs;HSP70-PCs在10-12μg/ml范围内可达到刺激树突状细胞最强效果,用HSP70-PCs负载的DC能增强T细胞的增殖和活化能力,其诱导的CTL对小鼠胰腺癌MPC83肿瘤细胞具有特异性杀伤作用;应用树突状细胞HSP70多肽肿瘤疫苗治疗荷瘤小鼠能显著抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠存活期。结论:用上述层析法可分离出较高纯度、保留肿瘤抗原信息的HSP70-PCs;体外将其负载经联合细胞因子诱导培养的DC可激活T淋巴细胞,产生对该肿瘤细胞的特异性杀伤效应。体内对胰腺癌荷瘤小鼠具有显著的免疫治疗效果。

全文目录

中文摘要  7-8
英文摘要  8-10
前言  10-12
实验设计流程图  12-13
材料和方法  13-53
  一、实验材料  13-18
  二、实验方法  18-28
  三、结果  28-47
  四、讨论  47-53
结论  53-54
参考文献  54-57
文献综述:热休克蛋白70-多肽复合物与肿瘤免疫研究进展  57-66
  1.HSP70的生物学特性  58
  2.HSP07在肿瘤组织中的表达及意义  58-60
  3.HSP70一PCS在肿瘤免疫中的作用机制  60-62
  4.HSP70一PCs在肿瘤免疫治疗中的应用  62-63
  5.应用前景  63-64
  参考文献  64-66
致谢  66-67
在读硕士期间发表文章  67

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