学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

马传贫病毒弱毒株前病毒gp90基因在马体内的变异分析

作　者: 杨彬
导　师: 王凤龙；周建华
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 马传染性贫血病毒 gp90基因 N-连接糖基化序列分析突变
分类号: S852.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 15次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

为了研究gp90基因在我国马传贫驴白细胞弱毒疫苗株致弱过程中的变异规律,本实验以EIAV强毒辽宁株(EIAV-L)感染一匹健康马,此马发病死后,采集脾脏组织以nested-PCR扩增前病毒gp90基因片段;以驴强毒株(EIAV-D)感染一匹健康马,同时以马传染性贫血驴白细胞弱毒疫苗株(EIAV-DLA)分别接种两匹健康马,从不同时期(15、45、75、105、135d)马外周血单核细胞中以nested-PCR扩增前病毒gp90基因片段。将所得的100个EIAV-DLAgp90的克隆株与EIAV-L的gp90核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行分析比较发现,核苷酸同源性最低为96.1%,最高为97.4%,编码的氨基酸同源性最低为91.6%,最高为95.8%。每个时期核苷酸序列平均差异率分别是3.295%、3.145%、3.3%、3.185%、3.645%,总平均差异率为3.314%。每个时期氨基酸序列平均差异率分别是5.52%、5.51%、5.565%、5.56%、6.365%,总平均差异率为5.704%。变异有明显的规律,变异主要包括点突变和缺失,从单个马、单个时期来分析,突变的氨基酸位点非常保守,且变异的趋势高度一致。但是纵向比较两匹免疫马五个时期gp90基因编码的氨基酸序列,每个时期的突变的氨基酸位点又与其他时期不完全相同。EIAV-L的gp90基因编码的氨基酸有20个N-连接糖基化位点,EIAV-DLA的gp90基因编码的氨基酸序列上,N-连接糖基化位点数目平均是17.2个,其中有11个N-连接糖基化位点是高度保守的,在主要中和位点(PND)上,有3处不稳定的突变。EIAV-DLA株与EIAV-D株的gp90序列的比较结果显示:来源于同一免疫马体内的不同克隆株之间的gp90基因存在有密切的遗传关系,不同马体内来源的gp90基因克隆株之间存在一定的差异,这种差异可能与EIAV-DLA所处的不同的宿主环境有关。EIAV-DLA株的gp90基因在马体内种群较EIAV-D株的种群均一。EIAV-D株gp90基因在马体内的变异随着时间的推移较EIAV-DLA株大。EIAV-DLA株的gp90基因在马体内的进化速率较EIAV-D株慢。免疫选择压力在EIAV的gp90基因变异中不起主要作用。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-10
1 引言  10-17
  1.1 EIAV 的免疫机理  10-12
    1.1.1 EIAV 的体液免疫机理  10-11
    1.1.2 EIAV 的细胞免疫机理  11-12
  1.2 囊膜变异与 EIAV 免疫机理  12-14
    1.2.1 囊膜变异对免疫识别的效应  12
    1.2.2 囊膜变异对体液免疫的效应  12-13
    1.2.3 囊膜变异对细胞免疫的效应  13-14
  1.3 EIAV 囊膜基因在感染马体内的进化  14
  1.4 我国对 EIAV 的研究现状  14-16
  1.5 EIAV 疫苗研制的启示  16
  1.6 本课题的研究目的和意义  16-17
2 材料和方法  17-21
  2.1 材料  17-18
    2.1.1 病毒  17
    2.1.2 载体和菌株  17
    2.1.3 试剂  17
    2.1.4 引物  17-18
    2.1.5 培养基  18
    2.1.6 主要仪器  18
  2.2 方法  18-21
    2.2.1 攻毒及实验样本的采集  18
    2.2.2 马外周血白细胞的分离  18-19
    2.2.3 前病毒 DNA 的提取  19
    2.2.4 EIAV 前病毒gp90 基因扩增  19
    2.2.5 PCR 产物的克隆及测序  19-20
    2.5.6 测序结果分析  20-21
3 结果  21-43
  3.1 EIAV 前病毒DNA NESTED-PCR 扩增产物  21-22
  3.2 EIAV－DLA 株及EIAV－L 株GP90 序列比较  22-37
    3.2.1 EIAV－DLA 株及 EIAV－L 株gp90 核苷酸序列比较  22-26
    3.2.2 EIAV－DLA gp90 氨基酸突变位点分析  26-28
    3.2.3 EIAV－DLA gp90 氨基酸 N-连接糖基化位点变异分析  28-37
  3.3 EIAV－DLA 株与 EIAV－D 株的 GP90 序列的比较结果  37-41
    3.3.1 EIAV－DLA 株与 EIAV－D 株的gp90 序列平均差异率比较  37-39
    3.3.2 EIAV－DLA 株与 EIAV－D 株的gp90 氨基酸序列进化树分析  39-41
    3.3.3 gp90 基因同义替换率（ds）/非同义替换率（dn）值的比较  41
  3.4 EIAV－DLA 株与 EIAV－D 株的 PND 序列的比较结果  41-43
    3.4.1 EIAV－DLA 株与 EIAV－D 株的 PND 序列平均差异率比较  41-42
    3.4.2 EIAV－DLA 株与 EIAV－D 株的 PND 氨基酸序列进化树分析  42-43
4 讨论  43-46
  4.1 EIAV－DLA GP90 基因变异及其生物学意义  43-44
  4.2 EIAV－DLA GP90 氨基酸N-连接糖基化位点变异及其生物学意义  44-45
  4.3 EIAV－DLA 株与 EIAV－D 株的 GP90 序列比较分析  45
  4.4 EIAV GP90 基因同义替换率（DS）  45
  4.5 EIAV－DLA 株与 EIAV－D 株的 PND 序列的比较分析  45-46
5 结论  46-47
致谢  47-48
参考文献  48-55
作者简介  55

马传贫病毒弱毒株前病毒gp90基因在马体内的变异分析

内容摘要

全文目录

相似论文