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转基因何首乌毛状根中多糖类成分的初步研究

作　者: 边婧
导　师: 于荣敏
学　校: 暨南大学
专　业: 药物化学
关键词: 转基因何首乌毛状根多糖分离纯化结构分析
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 85次
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内容摘要

本论文以转基因何首乌毛状根为研究对象,对其中的多糖组分进行了提取、分离、纯化及结构鉴定等方面的初步研究。本课题采用热水浸提乙醇分级沉淀的方法从转基因何首乌毛状根中提取得到粗多糖,粗多糖经过DEAE-纤维素离子交换层析和凝胶Sephacryl S-100凝胶柱层析分级纯化得到四个精多糖。经过凝胶过滤法、紫外光谱扫描、比旋度法验证,所得的四个精多糖为均一多糖。采用苯酚-硫酸法检测精多糖HSWB-SB、HSWb-SD的总糖含量,分别为97.25%和98.38%;采用凝胶过滤法测得HSWB-SB、HSWb-SD的分子量分别为11.81KDa和32.45KDa;采用离子色谱法、气相色谱法确定了这两个多糖的单糖组成:HSWB-SB由鼠李唐、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖组成,其摩尔比为1.75:2.53:0.65:1.21:5.12;HSWb-SD为葡聚糖。经甲基化分析、完全酸水解、部分酸水解和高碘酸氧化-Smith降解等化学分析方法并结合HPAEC-PAD、GC-MS、UV、FT-IR、NMR等仪器分析方法,推测出这两个多糖可能的一级结构:HSWB-SB主链是由(1→2,3)-α-Rha,(1→6)-α-gal,(1→6)-α-glc,(1→4,6)-α-glc,并由(1→3)-β-gal,α-ara,(1→3)-α-rha,(1→4)-α-glc,α-gal,α-xyl残基组成四条侧链分支;HSWb-SD主链是由(1→6)-α-glc,(1→6)-β-glc,(1→4,6)-β-glc,(1→3)-α-glc,(1→3,6)-β-glc构成,α-glc构成了侧链的末端。体外生物活性初步研究结果显示,浓度为400μg/ml,HSWB-SB对MCF-7、K562具有最大细胞增殖的抑制率,分别为42.65%、34.25%;浓度为400、200μg/ml,HSWb-SD对MCF-7、K562具有最大细胞增殖的抑制率,分别为41.35%、36.12%。

全文目录

摘要  4-5
ABSTRACT  5-7
目录  7-9
第一章前言  9-17
  1.1 毛状根简介  9-10
    1.1.1 发根农杆菌及其Ri质粒  9-10
    1.1.2 国内外研究进展  10
  1.2 何首乌简介  10-11
  1.3 何首乌的药用价值及其主要活性成分  11-12
    1.3.1 何首乌的药用价值  11
    1.3.2 何首乌的主要化学成分  11-12
  1.4 植物类多糖简介  12-13
    1.4.1 抗肿瘤多糖药物  12
    1.4.2 抗病毒多糖药物  12-13
    1.4.3 抗衰老多糖药物  13
  1.5 植物多糖的提取分离、纯化及表征鉴定  13-15
    1.5.1 植物多糖的提取分离、纯化  13-14
    1.5.2 植物多糖的表征鉴定特征  14-15
  1.6 立题依据  15-17
第二章转基因何首乌毛状根多糖的提取、分离和纯化  17-32
  2.1 引言  17-18
  2.2 实验试剂及仪器  18-19
    2.2.1 实验试剂  18
    2.2.2 实验仪器  18-19
  2.3 实验方法  19-22
    2.3.1 转基因何首乌毛状根多糖的提取  19-20
    2.3.2 转基因何首乌毛状根多糖的分离纯化  20-21
    2.3.3 转基因何首乌毛状根多糖的纯度鉴定  21-22
  2.4 实验结果  22-31
    2.4.1 转基因何首乌毛状根多糖的提取  22-23
    2.4.2 转基因何首乌毛状根多糖的分离纯化  23-27
    2.4.3 转基因何首乌毛状根多糖的纯度鉴定结果  27-31
  2.5 本章小结  31-32
第三章转基因何首乌毛状根多糖的结构分析  32-65
  3.1 引言  32-33
  3.2 实验材料、试剂和仪器  33-35
    3.2.1 实验材料  33
    3.2.2 实验试剂  33
    3.2.3 实验仪器  33-35
  3.3 实验方法  35-40
    3.3.1 苯酚-硫酸法检测总糖含量  35
    3.3.2 凝胶过滤法测定多糖分子量  35-36
    3.3.3 单糖组成分析  36-37
    3.3.4 红外光谱分析  37
    3.3.5 部分酸水解样品的制备  37-38
    3.3.6 高碘酸氧化-Smith降解  38-39
    3.3.7 多糖甲基化分析  39-40
    3.3.8 多糖的核磁共振分析  40
  3.4 实验结果  40-65
    3.4.1 苯酚-硫酸法检测总糖含量  40-41
    3.4.2 转基因何首乌毛状根多糖分子量的测定  41-42
    3.4.3 单糖组分分析  42-46
    3.4.4 转基因何首乌毛状根多糖HSWB-SB的结构研究  46-65
第四章转基因何首乌毛状根多糖体外抗肿瘤活性的研究  65-69
  4.1 引言  65
  4.2 实验材料及仪器  65-66
    4.2.1 实验材料  65
    4.2.2 实验仪器  65-66
  4.3 实验方法  66-67
    4.3.1 肿瘤细胞的培养  66
    4.3.2 实验分组及处理  66
    4.3.3 四甲基偶氮噻唑蓝(MTF)法测定  66
    4.3.4 数据处理  66-67
  4.4 实验结果  67-68
    4.4.1 转基因何首乌毛状根多糖对人乳腺癌MCF-7细胞生长的影响  67
    4.4.2 转基因何首乌毛状根多糖对人慢性髓性白血病细胞K562生长的影响  67-68
  4.5 本章小结  68-69
第五章全文总结  69-71
  5.1 转基因何首乌毛状根多糖分离纯化和理化性质研究  69
  5.2 转基因何首乌毛状根两种均一多糖的结构分析  69-70
  5.3 转基因何首乌毛状根多糖的体外免疫活性研究  70
  5.4 本论文的创新点  70-71
参考文献  71-75
致谢  75

转基因何首乌毛状根中多糖类成分的初步研究

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