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环介导等温扩增检测弓形虫方法的建立及初步应用

作　者: 葛海燕
导　师: 朱斌
学　校: 苏州大学
专　业: 遗传学
关键词: 环介导等温扩增弓形虫基因诊断定量检测
分类号: S854.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 163次
引　用: 4次
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内容摘要

目的:建立一种灵敏度高、特异性强、简单快速、低成本检测弓形虫DNA的方法。方法:采用环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立了检测弓形虫DNA的方法,并进行特异性、敏感性评估,在此基础上建立依据SYBR Green I的定量方法及通过显色反应直接判断结果的简便方法。为验证我们建立方法的临床应用价值,最后用建立的方法对57例孕妇外周血标本进行了检测。结果:通过对建立的LAMP扩增弓形虫DNA反应体系的优化,发现镁离子影响较大,其它如甜菜碱、温度等影响不大。特异性评估表明仅弓形虫检测阳性,而猪肉绦虫、血吸虫等寄生虫检测为阴性,酶切鉴定结果进一步证明了扩增的特异性。敏感性检测下限为每反应管10拷贝。以重组质粒制作的标准曲线显示,循环阈值与模板浓度有良好的线性关系,相关系数0.929,扩增效率0.961。对57例孕妇标本检测,发现2例阳性,定量检测值均约103拷贝/μl。结论:本研究中建立的LAMP检测弓形虫基因组DNA方法,特异性强、敏感性高、简便快速且成本低,有望在临床检测中发挥一定的作用。

全文目录

中文摘要  3-4
Abstract  4-6
一、引言  6-9
二、正文  9-26
  1. 材料  9-10
  2. 方法  10-17
  3. 结果  17-23
  4. 讨论  23-26
三、结论  26-27
四、参考文献  27-30
五、文献综述  30-41
六、缩略词表  41-42
七、攻读学位期间发表的论文  42-43
八、致谢  43

环介导等温扩增检测弓形虫方法的建立及初步应用

内容摘要

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