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转基因家蚕丝腺生物反应器表达hIGF-Ⅰ的研究

作　者: 赵越
导　师: 贡成良
学　校: 苏州大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 转基因家蚕转化细胞 piggyBac转座子丝蛋白基因启动子胰岛素样生长因子-I
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 107次
引　用: 1次
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内容摘要

家蚕丝腺是合成、分泌蚕丝蛋白的重要器官,具有作为生物反应器的基本特点。为了实现人类胰岛素生长因子-I(hIGF-I)在转基因家蚕细胞和丝腺组织中的表达,我们以家蚕丝胶基因启动子(Ser-1)驱动人胰岛素样生长因子(hIGF-I),构建了带有家蚕杆状病毒极早期基因启动子(ie-1)控制的新霉素抗性基因(neo)表达盒的转基因载体pigA3GFP-ser-hIGF-ie-neo,在可表达转座酶的辅助质粒存在下,转染BmN培养细胞,以700~800μg/mL的G418筛选,获得了稳定转化细胞系;ELISA检测检测结果显示,5×105个细胞/ml hIGF-I的表达水平约7.8×103 pg;转基因载体pigA3GFP-Ser-hIGF-ie-neo通过精子介导导入蚕卵,利用neo、gfp基因的双重筛选,经过PCR和点杂交鉴定,获得了转基因家蚕,ELISA检测结果显示,在G1代hIGF-I在每克中部丝腺组织中的表达水平为2.44×103 pg。此外,用家蚕丝素Fhx/P25启动子驱动hIGF-I,构建了带有ie-1启动子控制的neo基因表达盒的转基因载体pigA3GFP- Fhx/P25-hIGF-ie-neo,该载体以精子介导法导入蚕卵,通过筛选并结合分子生物学鉴定,获得了转基因家蚕,ELISA检测结果显示,在G1代hIGF-I在每克后部丝腺组织中的表达水平为152×103 pg。

全文目录

中文摘要  3-4
Abstract  4-6
引言  6-7
第一章生物反应器的研究概况  7-11
  1 生物反应器的发展概况  7-8
  2 家蚕生物反应器的研究概况  8-10
  参考文献  10-11
第二章转基因家蚕的研究概况  11-23
  1 转基因动物的研究  11-12
  2 转基因家蚕的研究  12-20
    2.1 转基因方法  12-14
    2.2 转基因载体  14-19
    2.3 家蚕转基因的应用及存在问题  19-20
  参考文献  20-23
第三章家蚕生物反应器生产的外源蛋白  23-27
  一、药用蛋白基因的表达  23
  二、兽药用蛋白基因的表达  23
  三、农药用蛋白基因的表达  23
  四、人疫苗基因的表达  23-24
  五、胰岛素样生长因子的研究概况  24-25
  参考文献  25-27
第四章实验中的一般材料和常用方法  27-39
  1 一般材料  27-33
  2 常用仪器  33
  3 常用方法  33-39
第五章稳定转化家蚕细胞特异表达hIGF-I  39-47
  1 材料与方法  39-41
  2 结果与分析  41-44
  3 讨论  44-46
  参考文献  46-47
第六章转基因家蚕中部丝腺特异表达hIGF-I  47-55
  1 材料与方法  48-49
  2 结果与分析  49-52
  3 讨论  52-53
  参考文献  53-55
第七章转基因家蚕后部丝腺表达hIGF-I  55-66
  1 材料与方法  55-58
  2 结果与分析  58-63
  3 讨论  63-64
  参考文献  64-66
结论  66-67
附录一符号说明（英汉双解缩略词表）  67-68
附录二在校期间发表的论文及科研成果  68-69
致谢  69

转基因家蚕丝腺生物反应器表达hIGF-Ⅰ的研究

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