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2型猪链球菌胞壁蛋白免疫蛋白组学研究

作　者: 党源
导　师: 王兴龙
学　校: 吉林大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 2型猪链球菌免疫蛋白质组学双向电泳质谱
分类号: S852.61
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 212次
引　用: 3次
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内容摘要

猪链球菌（Streptococcus suis,S.suis）是一种重要的人畜共患病病原体,能够导致猪和人的脑膜炎、败血病、胸膜炎、关节炎、永久性耳聋及突发性死亡,给生命和财产构成极大威胁。猪链球菌共有35个血清型,其中2型猪链球菌流行最广、致病性最强。人们目前对2型猪链球菌（Streptococcus suis type 2,SS2）有了一定的认识,但其致病机理还不明确,缺少有效的诊断和疫苗靶位,给该病的预防、诊断和治疗带来了困难。本研究首先采用THB培养基培养2型猪链球菌,采用不破碎细菌的方法成功的提取了细胞壁蛋白（Cell wall-associated proteins,CWP）;应用免疫蛋白质组学方法,以自制家兔高免血清为一抗,HRP标记的羊抗兔为二抗,对转印到PVDF膜上的细胞壁蛋白进行检测,以筛选具有免疫原性的蛋白点,并将重复胶上的相应的点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（Matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS）,并进行肽质量指纹图谱（Peptides mass fingerprint, PMF）分析。结果表明606菌株和449菌株中共筛选出44个主要免疫原性蛋白点,用质谱鉴定属于26种蛋白,即:溶菌酶释放蛋白（Muramidase-released protein）、翻译起始因子2（Translation initiation factor 2）、内皮素转换酶1（Endothelin-converting enzyme 1）、hypothetical protein SSU05₂031、3 -酮（酰基载体蛋白）还原酶[3-ketoacyl-（acyl-carrier-protein） reductase]、半胱氨酸合成酶K/M:半胱氨酸合酶A（Cysteine synthase K/M:Cysteine synthase A）、磷酸激酶（Phosphoglycerate kinase）、金属内肽酶（Predicted metalloendopeptidase）、谷胱甘肽还原酶（Glutathione reductase）、烯醇酶（Enolase）、O-乙酰丝氨酸裂解酶（O-acetylserine lyase）、5’ -核苷酸酶（Putative 5’-nucleotidase）等,分析了他们的功能和位置,这些蛋白的功能除了免疫功能外,还包括毒力因子、序列加工、运输活动、碳水化合物代谢、脂肪酸代谢、能量代谢、应激蛋白和细胞骨架等,并对KasⅡ进行了表达。以上研究结果为2型猪链球菌病的诊断抗原和新型疫苗研究以及该菌的免疫机理研究提供了科学依据。

全文目录

内容提要  5-6
英文缩写词表  6-9
前言  9-11
第一篇文献综述  11-27
  第1章免疫蛋白质组学技术及其在病原微生物研究中的应用  11-21
    1.1 免疫蛋白质组学  11-12
    1.2 免疫蛋白质组学的技术  12-16
    1.3 免疫蛋白质组学在疫苗候选靶位筛选中的应用  16-20
    1.4 展望  20-21
  第2章 2 型猪链球菌的毒力相关因子研究进展  21-27
    2.1 荚膜多糖  22
    2.2 溶菌酶释放蛋白和胞外因子  22-23
    2.3 溶血素  23
    2.4 粘附素  23-24
    2.5 IgG 结合蛋白  24
    2.6 谷氨酸脱氢酶  24
    2.7 纤连蛋白结合蛋白  24-25
    2.8 分泌型核酸酶(SsnA)  25
    2.9 甘油醛-3-磷酸脱氢酶  25
    2.10 烯醇酶  25-26
    2.11 其他被证明有免疫原性的 SS2 蛋白  26-27
第二篇研究内容  27-81
  第1章 2 型猪链球菌胞壁蛋白和家兔高免血清的制备  27-36
    1.1 材料与方法  27-33
    1.2 结果  33-35
    1.3 讨论  35
    1.4 小结  35-36
  第2章胞壁蛋白的双向电泳及免疫原性蛋白的筛选  36-56
    2.1 材料与方法  36-46
    2.2 结果  46-50
    2.3 讨论  50-55
    2.4 小结  55-56
  第3章质谱鉴定候选的免疫原性蛋白  56-70
    3.1 材料与方法  57-59
    3.2 结果  59-65
    3.3 讨论  65-69
    3.4 小结  69-70
  第4章 2 型猪链球菌免疫原性蛋白相关基因的克隆及序列分析  70-81
    4.1 材料与方法  70-76
    4.2 结果  76-79
    4.3 讨论  79-80
    4.4 小结  80-81
结论  81-82
参考文献  82-96
致谢  96-97
详细摘要  97-99
Abstract  99-102
导师简介  102-103
作者简介  103

2型猪链球菌胞壁蛋白免疫蛋白组学研究

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