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神农香菊（Dendranthema indicum var.aromaticum）组织培养及细胞悬浮培养体系的建立

作　者: 董春艳
导　师: 何淼
学　校: 东北林业大学
专　业: 园林植物与观赏园艺
关键词: 神农香菊组织培养愈伤诱导悬浮培养
分类号: S567.239
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

神农香菊(Dendranthema indicum var. aromaticum)为菊科菊属植物,是一种新的野生资源,其花、叶及根均具有浓郁的香气,民间常以其花、叶阴干作香囊。其花、叶有清热解毒的功效,是一种值得研究、开发、利用的药用植物新资源。本论文主要探讨了野生植物神农香菊组织培养及细胞悬浮体系的建立,为神农香菊的原生质体分离、纯化以及原生质体融合提供一定的理论基础。主要研究结果如下：1、采用不同植物生长调节剂6-BA和NAA组合对神农香菊丛生芽诱导的实验表明：神农香菊的嫩茎比较容易诱导出丛生芽,以茎段为外植体,在含有6-BA 0.1 mg/L和NAAO.1 mg/L的培养基上不定芽诱导率可达90%,且腋芽长势良好,平均每个外植体可以产生8.7个不定芽；培养基为MS+6-BA 0.3 mg/L +NAA 0.1 mg/L时,较适宜神农香菊丛生芽的继代培养；在6-BA和NAA的不同组合处理时,神农香菊均能生根,但是在MS+NAA0.3 mg/L培养基中根最长,达5.8cm,数量最多且根最粗壮,在其它配方中,根较细长柔弱,生根率较低。2、以花器官不同组织部位为外植体,通过愈伤组织途径建立无菌培养体系,结果表明：诱导花瓣愈伤组织的最佳培养基为MS+ NAA0.2 mg/L+6-BA1.5 mg/L;诱导花托愈伤组织的最佳培养基为MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2 mg/L。采用不同发育时期的神农香菊花托作为外植体进行组织培养,成功诱导了愈伤组织,花托处于显蕾初期,诱导分化效果较好；处于同一时期的花托,诱导分化率随着直径的增大而降低,直径越小,形成愈伤组织速度越快,诱导分化效果越好；诱导花梗愈伤组织的最佳培养基为MS+NAA0.1 mg/L+6-BA1.0 mg/L+2,4-D2.0 mg/L;花药在MS+6-BA2.0 mg/L+2,4-D1.0 mg/L,蔗糖浓度为6%的培养基上诱导出愈伤组织,然后转接到MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.2 mg/L培养基上产生的不定芽数量最多。各种花器官外植体诱导愈伤组织由易到难依次为花托>花药>花梗>花瓣。NAA可以增强其生根的效果,浓度以0.3mg/L为宜,移栽成活率达80%以上。3、神农香菊不同外植体对愈伤组织诱导有很大的影响,其中无论是愈伤诱导率、愈伤长势还是愈伤硬度,茎段的为最佳的外植体,诱导率虽然不是最高,但是其硬度最低,且长势都好于其他外植体。在添加BA0.2 mg/L和2,4-D1.0 mg/L的培养基上诱导率达到100%。培养基为MS+NAA0.1 mg/L+6-BA0.5 mg/L时,愈伤诱导成芽率最高,达86.7%。4、愈伤组织接种在液体培养基MS+BA0.2 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L上,愈伤组织的生长量最大,2g愈伤接种18d后鲜重达到8.12g。细胞悬浮培养过程中,悬浮培养物的鲜重、pH和蔗糖浓度都发生了一定的变化,其生长曲线呈“S”型增长,存在生长延滞期、对数生长期、停滞期；pH值的变化呈现一直下降趋势,但是可以一直保持在4.0以上,可以维持细胞生长酸度；蔗糖浓度也呈现下降趋势,主要是因为在细胞生长过程中要消耗大量的糖所致。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-11
1 绪论  11-21
  1.1 引言  11
  1.2 植物组织培养及细胞悬浮培养研究的进展  11-17
    1.2.1 植物组织培养研究进展  11-13
    1.2.2 植物细胞悬浮培养研究的国内外现状  13-14
    1.2.3 植物细胞悬浮培养的相关技术研究  14-16
    1.2.4 植物细胞悬浮培养的主要因子研究  16-17
    1.2.5 植物细胞悬浮培养的生长特性的研究  17
  1.3 神农香菊的研究进展  17-18
    1.3.1 神农香菊及其资源条件  17-18
    1.3.2 神农香菊的开发利用情况  18
    1.3.3 神农香菊的应用价值  18
  1.4 研究的目的及意义  18-21
2 神农香菊茎段组织培养体系的建立  21-29
  2.1 实验材料  21
  2.2 实验方法  21-22
    2.2.1 植物材料的无菌处理  21
    2.2.2 初代培养  21
    2.2.3 芽分化培养及继代培养  21
    2.2.4 生根培养  21-22
    2.2.5 移栽  22
    2.2.6 培养条件及结果统计方法  22
  2.3 结果与分析  22-27
    2.3.1 外植体表面消毒方法的确定  22-24
    2.3.2 不同质量浓度6-BA、NAA、2,4-D组合对神农香菊茎段萌发的影响  24-25
    2.3.3 不同质量浓度6-BA对神农香菊茎段增殖的影响  25-26
    2.3.4 不同质量浓度NAA和6-BA组合对神农香菊生根和移栽的影响  26-27
  2.4 本章小结  27-29
3 神农香菊花器官组织培养体系的建立  29-39
  3.1 材料  29
  3.2 方法  29-30
    3.2.1 分等级  29
    3.2.2 无菌外植体的处理  29
    3.2.3 愈伤组织及不定芽的诱导  29
    3.2.4 愈伤组织的增殖培养及芽的分化  29-30
    3.2.5 生根  30
    3.2.6 移栽  30
    3.2.7 培养条件  30
    3.2.8 观察与记录  30
    3.2.9 数据统计及处理  30
  3.3 结果与分析  30-37
    3.3.1 不同生长调节剂组合对花梗愈伤组织诱导及不定芽再生的影响  30-31
    3.3.2 不同生长调节剂组合对花瓣愈伤组织诱导及不定芽再生的影响  31-32
    3.3.3 不同生长调节剂组合对花药愈伤组织诱导及不定芽再生的影响  32-33
    3.3.4 不同发育时期花托对神农香菊愈伤组织诱导及不定芽再生的影响  33-36
    3.3.5 不同质量浓度6-BA和NAA组合对不定芽生根和移栽的影响  36-37
  3.4 本章小结  37-39
4 神农香菊细胞悬浮体系的建立  39-47
  4.1 实验材料  39
  4.2 实验方法  39-40
    4.2.1 外植体的选择  39
    4.2.2 统计方法  39
    4.2.3 愈伤组织悬浮培养  39
    4.2.4 愈伤组织细胞悬浮培养的生长曲线的绘制  39-40
    4.2.5 悬浮细胞液的pH值测定  40
    4.2.6 培养液中可溶性糖含量的测定  40
  4.3 结果与分析  40-46
    4.3.1 外植体的选择  40-43
    4.3.2 光培养与暗培养对愈伤组织诱导的影响  43
    4.3.3 细胞悬浮体系的建立  43-44
    4.3.4 生长曲线的绘制  44-45
    4.3.5 神农香菊悬浮细胞系pH变化  45
    4.3.6 神农香菊悬浮细胞糖消耗变化  45-46
  4.4 本章小结  46-47
讨论  47-49
结论  49-50
参考文献  50-55
攻读学位期间发表的学术论文  55-56
致谢  56-57

神农香菊（Dendranthema indicum var.aromaticum）组织培养及细胞悬浮培养体系的建立

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