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研究背景：糖尿病周围神经病变(diabetic neuropathy, DN)是糖尿病并发症(diabetic complications)中重要的病变之一,是以上下肢对称性疼痛和感觉异常为主要临床表现,电生理检查表现为运动神经及感觉神经功能异常的-种疾病。目前在临床上,糖尿病神经病变用药选择上存在很多局限,尚未发现一种安全有效治疗糖尿病周围神经病变的新药。所以寻找有效预防和治疗DN的药物是目前研究的热点。糖尿病神经病变的发病机制目前尚不完全明确,涉及细胞膜上离子通道的变化,及高血糖状态下体内一系列生化反应,氧化应激则被认为是糖尿病神经病变发生的核心机制之一。高血糖引起细胞内超氧分子的增多,超氧分子的增多会使细胞内GADPH活性降低,而GADPH减少则将激活糖尿病神经病变发生的经典途径。活血解毒方在临床上治疗糖尿病神经病变有着良好的疗效,在动物的预实验中发现对糖尿病大鼠周围神经病变有着明显的改善作用。并且根据国内外文献报道,活血解毒方中的中药有着明确的抗氧化应激的作用。虽然目前市面上有着预防和治疗糖尿病神经病变的中成药制剂,但是尚无通过抑制氧化应激来防治糖尿病神经病变的药物,亦无通过抑制氧化应激中的PKC途径来延缓和治疗糖尿病周围神经病变的中成药。研究目的：本实验的目的是观察活血解毒方防治糖尿病大鼠神经病变的疗效,同时检测其对PKC途径的影响,深入揭示活血解毒方的药理机制。方法：本实验用链脲佐菌素65 mg/kg一次性腹腔注射的方法建立糖尿病大鼠周围神经病变模型。活血解毒方水提物中剂量组的大鼠给药量为0.29g/kg,为人临床等效剂量(按照体重换算,为6 0kg人的7倍用量),相当于原生药材11.55g/kg。活血解毒方水提物高剂量组为中剂量组的2倍。活血解毒方精提物,工艺由中药学院倪健教授提供；活血解毒方精提物中剂量组为1.07g/kg,为人临床等效剂量,相当于原生药材11.55g。活血解毒方精提物高剂量组和低剂量组的药量分别为中剂量组的2倍和1/2。甲钻胺大鼠给药量为300μg/kg,每日两次灌胃给药。模型组每日灌水两次,每次给水量为1 0ml/kg。每4周测大鼠血糖,神经传导速度,热板潜伏期。16周后处死动物取血后测丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD),总抗氧化能力,并对大鼠坐骨神经细胞进行光镜和电镜的形态学观察,应用免疫组化法观察大鼠坐骨神经中PKC表达的并运用IPP(Image-pro Plus) 6.0软件分析PKC的颜色强度变化。最后,采用Spss 13.0统计软件对数据进行分析处理。结果1血糖：给药前,模型组、甲钴胺组、活血解毒方水提物各组、精提物各组的血糖始终高于正常组的血糖,P<0.05；在第4周时,与模型组比较,活血解毒方精提物中剂量组血糖降低,P<0.05；在第12周时,与模型组比较,活血解毒方水提物中剂量组血糖降低,P<0.05。2热板潜伏期：在第4周时,与正常组比较,模型组热板反应潜伏期延长；与模型组比较,活血解毒方各组及甲钴胺组潜伏期缩短,P<0.05；与甲钴胺组比较,活血解毒方精提物高、低剂量组潜伏期缩短,P<0.05。在第8周时,与正常组比较,模型组热板反应潜伏期延长；与模型组比较,精提高剂量组,精提低剂量组,水提高剂量组,水提中剂量组及甲钴胺组潜伏期缩短,P<0.05。在第12周时,与正常组比较,模型组热板反应潜伏期延长；与模型组比较,精提高剂量,精提低剂量组,水提高剂量组,水提中剂量组及甲钴胺组潜伏期缩短,P<0.05。3神经传导速度：与正常组比较,模型组神经传导速度下降；与模型组比较,活血解毒方水提物高剂量组、活血解毒方精提物中剂量组、甲钴胺组的神经传导速度增快,P<0.05。4 MDA和总抗氧化能力的值：与模型组比较,正常组,活血解毒方精提物高、中、低剂量组,活血解毒方水提物高、中剂量组的MDA值降低,P<0.05。与模型组比较,正常组和活血解毒方精提物高、中剂量组的总抗氧化能力增强, P<0.05。5坐骨神经中PKC的表达：与模型组相比,活血解毒方水提物高、中剂量组,活血解毒方精提高剂量组PKC的表达减弱,P<0.05。与正常组比较,模型组,活血解毒方精提物中、低剂量组,甲钴胺组的PKC表达增强,P<0.05。6病理和电镜显示：光镜下可见,正常组坐骨神经髓鞘、轴索结构清楚；模型组髓鞘板层结构不清,部分区域趋于溶解,轴索增粗；活血解毒方水提物高、中剂量组与精提物各剂量组髓鞘变性程度减轻；甲钴胺组髓鞘变性程度减轻。电镜下可见：正常组髓鞘板层结构清晰,轴突内线粒体结构完好,神经纤维排列规整。模型组髓鞘板层分离,变性融合,轴突内线粒体变性肿胀形成空泡状,嵴稀少,排列紊乱,轴突内神经纤维排列紊乱。而活血解毒水提物高剂量组与精提物高剂量组均能改善糖尿病大鼠坐骨神经的脱髓鞘、轴突内线粒体肿胀等病理改变。结论1链脲佐菌素诱导的16周糖尿病大鼠出现了糖尿病神经病变的特征性改变。2活血解毒方具有防治糖尿病周围神经病变发展的作用。3活血解毒方具有减轻体内氧自由基损伤,抗氧化应激的作用。4活血解毒方防治糖尿病神经病变的机制可能是由于其可减少MDA的生成并且增强总抗氧化能力,抑制PKC的表达。
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