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TLR4与TLR9介导的信号传导通路在炎症性肠病中的作用研究

作　者: 黄丽
导　师: 徐辉
学　校: 泸州医学院
专　业: 内科学
关键词: 炎症性肠病 TLR4 TLR9 NF-κB 免疫组织化学溃疡性结肠炎 TLR9
分类号: R574
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的.炎症性肠病(Inflammatory bowel disease,IBD)包括溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)和克罗恩病(Crohn disease,CD)。近年来该病的发病率有逐渐增高的趋势,其病因和发病机制涉及遗传、环境、免疫、感染等因素,但至今尚未阐明。新近研究发现Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)是参与非特异性免疫的一类重要分子,也是连接非特异性免疫和特异性免疫的重要桥梁。Toll样受体属于高度保守的Ⅰ型跨膜蛋白(typeⅠtransmembrance protein),能识别病原相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs),通过髓样分化因子88 (myeloid differentiation factor 88,MyD88)-核因子κB (nuclear factor-κB,NF-κB)等多条信号途径,启动细胞活化进程,上调主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex, MHC)和共刺激分子表达,分泌细胞因子等,从而进一步诱导炎症免疫反应,同时活化的TLRs也能激活T细胞,启动获得性免疫反应。本课题利用葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium, DSS)结肠炎模型研究结肠炎小鼠肠黏膜组织中TLR4.TLR9 的学位论文">TLR9与NF-κB及促炎症细胞因子TNF-α的表达以及相互关系,探讨TLR4、TLR9信号途径在实验性结肠炎中的作用。方法建立小鼠葡聚糖硫酸钠结肠炎模型,进行大体和组织病理学评价：6-8周龄健康雄性Balb/c小鼠分为两组：A组(正常对照组,n=5)：蒸馏水自由饮用7天。B组(DSS急性结肠炎组,n=15):5%DSS溶液自由饮用7天。造模7天后处死小鼠,免疫组化方法检测小鼠结肠黏膜TLR4、TLR9、NF-κB、TNF-α蛋白表达。结果1.小鼠葡聚糖硫酸钠结肠炎造模成功,小鼠结肠黏膜有明显的肉眼和组织学炎症。2.免疫组化检测到TLR4和TLR9在B组小鼠结肠黏膜表达显著高于A组(P＜0.05)；NF-κB在B组结肠黏膜表达显著高于A组(P＜0.05),TNF-α蛋白在B组结肠黏膜表达显著高于A组(P＜0.05),TLR4与NF-κB、TNF-α的表达呈正相关,pearson相关系数r分别为0.816,0.834。TLR9与NF-κB、TNF-α的表达呈正相关,pearson相关系数r分别为0.781、0.807。3.小鼠结肠黏膜中TLR4和TLR9蛋白的表达存在关联并有较好的一致性结论1.DSS结肠炎小鼠结肠黏膜TLR4和TLR9的表达显著高于正常对照组。其表达越强,结肠黏膜损伤越重。2.NF-κB、TNF-α的表达显著高于正常对照组,且与TLR4和TLR9的表达呈平行关系。说明TLR4和TLR9的表达与NF-κB、促炎因子的表达密切相关,TLR4、9在结肠黏膜异常高表达经由其信号传导通路激活下游NF-κB以及炎症因子TNF-α的释放致使DSS结肠炎炎症反应发生及发展。3.TLR4和TLR9蛋白在DSS结肠炎小鼠结肠黏膜中的表达存在关联并有较好的一致性,提示二者可能在DSS诱导小鼠结肠炎的发生、发展过程中起协同作用,共同促成及加剧了炎症反应的发生及持续。目的：通过检测人类正常结肠黏膜、不同程度UC患者结肠黏膜的TLR4、TLR9蛋白的表达差异,探讨TLR4和TLR9在UC发生发展中的可能作用。方法：选取在成都市军区总医院消化内科确诊的活动期UC患者,依据临床资料、血、生化指标及内镜表现,计算UC疾病活动度(UCAI)。根据Truelove标准对UC进行病理学分级。免疫组织化学方法检测UC和正常对照结肠组织中TLR4、TLR9及NF-κBp65的表达。结果1.UC组患者病变部位大部分集中于远端结肠,活动度以轻、中度居多。UCAI评分与病理分级之间呈正相关。2.免疫组化发现正常肠黏膜只微弱表达或不表达TLR4、TLR9及NF-κB p65蛋白,而在UC结肠上皮和炎症细胞中的表达均高于正常对照,阳性率随病理学分级增高逐渐增高(p<0.05),与病理学分级呈正相关,TLR4和TLR9的表达存在关联并有较好的一致性。结论1.TLR4、TLR9在正常人体肠黏膜只微弱表达或不表达,可能与肠黏膜与肠内容物的耐受有关,而在UC中表达高度上调,阳性率随病理学分级的增高逐渐升高,且它们的表达强度反应了炎症的程度,推测TLR4和TLR9介导的识别PAMPs功能失调在UC发生、发展中起作用。2.NF-κB在UC中的表达显著高于正常对照组,且与TLR4和TLR9的表达呈平行关系。说明TLR4和TLR9的表达与NF-κB的表达密切相关,TLR4、9在结肠黏膜异常高表达经由其信号传导通路激活下游NF-κB,从而导致了UC的发生及发展。3.TLR4和TLR9蛋白在UC组织中的表达存在关联并有较好的一致性,提示二者可能在UC的发生、发展过程中起协同作用,共同促成及加剧了UC炎症反应的发生及持续。

TLR4与TLR9介导的信号传导通路在炎症性肠病中的作用研究

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