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硫辛酸对大鼠脊髓继发性损伤的保护作用及其机制的探讨

作　者: 张月娥
导　师: 张静
学　校: 河北医科大学
专　业: 康复医学与理疗学
关键词: 脊髓继发损伤丙烯醛自由基硫辛酸氧化应激
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:近年来,随着对脊髓继发性损伤(SCI)机制研究的不断深入,氧化应激的作用逐渐引起了人们的重视。研究已经证明,氧化应激反应产生的脂质过氧化产物丙烯醛是脊髓继发性损伤的潜在调节剂~[1],它可以促使体内氧自由基的产生,加剧自由基引起脂质过氧化,并通过正反馈使氧化应激损伤持续存在~[2]。因此,探寻减少或阻断丙烯醛产生的有效方法成为治疗SCI的有效方法。硫辛酸( alpha lipoic acid,LA)是一种强效抗氧化剂,研究发现它不仅能清除机体生理和病理过程中产生的各种自由基,减轻机体氧化应激~[3,4],还可有效清除丙烯醛等过氧化醛基[5]。国内外关于LA在脊髓继发损伤氧化应激方面的作用尚未见报道。本实验拟通过建立大鼠脊髓损伤模型,早期应用LA,采用运动评分法观察对大鼠脊髓损伤后功能恢复的影响,并通过硫代巴比妥酸法检测自(malondialdehyde MDA)浓度,黄嘌呤氧化酶法测定过氧化物酶(SOD)活性,免疫组化法结合计算机图像分析技术半定量测定丙烯醛(acrolein-ACR)的表达,进一步探讨LA对脊髓继发性损伤的保护作用,为临床治疗脊髓损伤寻找有效的措施和途径。方法:选取健康、成年Sprague-Dawley(SD)大鼠66只;体重240-280g,鼠龄3-4个月,雌雄不限。采用改良Allen’s-WD法制作脊髓损伤模型,将66只SD大鼠随机分为正常对照组6只,药物干预组30只即脊髓损伤+硫辛酸尾静脉注射组,损伤对照组30只即脊髓损伤+生理盐水尾静脉注射。脊髓损伤后24小时(h)、3天(d)、7d分别取材,每组各8只,其中4只做HE染色及免疫组化测丙烯醛表达情况,余直接取材通过使用分光光度计测组织中SOD、MDA的含量。损伤对照组和药物干预组各余6只大鼠分别于SCI后3、7、14、21d进行BBB运动评分观察行为学变化。采用SPSS13.0统计软件处理,三组间的脊髓组织SOD、MDA测定值、ACR平均光密度值及BBB运动评分值多组均数间比较采用单因素方差分析,均数间两两比较采用LSD检验。结果:1光镜下见正常组神经元细胞形态好,数量多,胞膜完整,未被破坏脊髓损伤后24h见局灶性出血、神经元细胞肿胀、变圆、数目减少,核周缩、碎裂,尼氏小体淡染或消失。硫辛酸治疗后24h可见神经元细胞肿胀减轻,数目较损伤组增多。脊髓损伤后7d损伤组神经元细胞数目明显减少,并有空泡形成。治疗组神经元形态接近正常,肿胀、坏死、空泡等改变比对照组明显减轻。24h及7d治疗组脊髓切片病理改变均较对照组轻。2 Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)行为学评分结果:三组在术前BBB评分均无明显差别P>0.05,术后3d、7d、14d、21d各时间点损伤组与硫辛酸治疗组比较均有高度显著差别(p<0.01),治疗组各时间点评分值显著高于损伤组;术后3d、7d、14d、21d各个时间点治疗组与正常组比较差异均不显著(p>0.05)治疗组各时间点评分值与正常组相近,但未达到正常值。3 SOD测定结果,硫辛酸治疗组24h、3d、7d的SOD活性值分别为173.7±6.9、221.1±16.7、225.3±13.8,随时间变化而明显递增。损伤组24h、3d、7d的SOD活性值分别为124.7±8.8、137.67±4.8、145.9±5.7随时间变化递增不明显,三个时间点两组SOD活性值比较均有高度显著差异(p<0.01)。第3d、7d治疗组与正常组(234.6±11.9)比较无显著差异(p>0.05),治疗组SOD活性值接近正常。4 MDA测定结果,硫辛酸治疗组24h、3d、7d的MDA含量分别为7.43±1.1、6.20±0.71、5.85±0.70,随时间变化而递减。损伤组24h、3d、7d的MDA含量分别为12.3±1.2、11.9±1.14、11.011±1.09随时间变化递减不明显,三个时间点两组MDA含量比较均有高度显著差异(p<0.01),治疗组在三个时间点的MDA含量均明显低于损伤组。第3d、7d治疗组与正常组(5.5±0.54)比较无显著差异(p>0.05),治疗组MDA含量接近正常。5脊髓组织丙烯醛免疫组化染色,硫辛酸治疗组24h、3d、7d的平均光密度值分别为0.2252±0.0402、0.1965±0.0435、0.1847±0.0401,随时间推移递减。损伤组的平均光密度值分别为0.3636±0.0100、0.3462±0.0157、0.3052±0.0162也随时间有下降趋势,治疗组在三个时间点的平均光密度值均明显低于损伤组,三个时间点两组平均光密度值比较均有高度显著差异(p<0.01)。第3d、7d治疗组与正常组(5.5±0.54)比较无显著差异(p>0.05),治疗组平均光密度值接近正常。结论:本实验进一步证实了脊髓继发损伤后脂质过氧化产物丙烯醛随时间的表达变化,同时验证了丙烯醛及自由基共同参与了脊髓继发性损伤神经元细胞的损害过程。强效抗氧化剂硫辛酸能抑制脊髓继发损伤过程中丙烯醛的表达,并能清除自由基,保护并促进内源性抗氧化酶类再生,对脊髓损伤继发伤神经元细胞有很好的保护作用,对机体运动功能的恢复有较显著的促进作用。

全文目录

中文摘要  4-7
英文摘要  7-11
研究论文硫辛酸对大鼠脊髓继发性损伤的保护作用及其机制的探讨  11-41
  前言  11
  材料与方法  11-19
  结果  19-21
  附图  21-29
  附表  29-32
  讨论  32-37
  结论  37-38
  参考文献  38-41
综述硫辛酸对大鼠脊髓继发性损伤的保护作用  41-54
  参考文献  50-54
致谢  54-55
个人简历  55

硫辛酸对大鼠脊髓继发性损伤的保护作用及其机制的探讨

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