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细粒棘球绦虫感染犬及EgM9蛋白免疫犬引起的免疫应答研究

作　者: 巫剑
导　师: 岳城；张壮志
学　校: 新疆农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 细粒棘球绦虫 EgM9蛋白犬免疫组织化学抗体反应
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目前,国内外对宿主抗细粒棘球绦虫免疫的研究主要集中在宿主体内的免疫保护、免疫逃避与免疫损伤机制。有很多关于细粒棘球绦虫病的中间宿主的免疫抗原Eg95的研究报道,但对终末宿主犬的免疫保护抗原还在研究当中。本研究通过免疫组织化学方法与分子生物学方法,探索宿主感染细粒棘球绦虫和EgM9蛋白免疫后,机体外周免疫系统、肠道的粘膜免疫系统产生免疫应答的情况,以期为临床研制相关疫苗提供实验依据。本研究首先经pET-41b重组质粒转化的大肠埃希菌(BL-21)对EgM9蛋白进行诱导表达,通过SDS-PAGE对表达产物进行分析,证明所表达的确实为EgM9蛋白,再对其进行纯化,得到符合免疫抗原要求的EgM9重组目的蛋白。将实验犬分为四组(Ⅰ组:EgM9蛋白免疫组;Ⅱ组:EgM9蛋白免疫后感染原头蚴组;Ⅲ组:直接感染原头蚴组;Ⅳ组:空白对照组),用纯化后的EgM9蛋白对Ⅰ组和Ⅱ组进行免疫试验,再分别对Ⅱ组和Ⅲ组人工感染原头蚴。将实验犬剖检后进行荷虫数计算,结果表明用EgM9蛋白免疫犬后,可以使犬取得一定的免疫保护效果。采集实验犬的肠系膜淋巴结和小肠,依据免疫酶组织化学和免疫荧光组织化学原理,运用直接法和抗原~抗体~抗体标记物法对其进行检测。直接法结果表明Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组犬的肠系膜淋巴结和小肠上存在IgG抗体,反应都呈阳性;抗原~抗体~抗体标记物法结果表明Ⅰ组、Ⅱ组表现阳性,而Ⅲ组呈阴性,荧光显微镜下有明显的荧光位点,说明该方法可以对免疫犬的肠系膜淋巴结和小肠上的IgG进行定位检测。通过Real-Time PCR对上述实验犬的肠系膜淋巴结和小肠组织中的三种细胞因子(IL-4、TGF-β和INF-γ)检测,表明I组和Ⅲ组实验犬的肠系膜淋巴结和小肠中IL-4与INF-γ均有明显变化,IL-4的数值远高于INF-γ,而在II组中,IL-4的数值虽然也高于INF-γ,但IL-4与INF-γ的数值同时也高于其他两组。结果表明不论对犬进行免疫还是感染,都能引起Th1型和Th2型反应,但以Th2型反应为主。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-8
符号及缩写表  8-10
第一部分概述  10-28
  第一章细粒棘球蚴病的研究进展  10-20
    1.1 细粒棘球绦虫生活史及流行病学  11-12
    1.2 细粒棘球绦虫分子生物学研究  12-15
    1.3 细粒棘球蚴病的免疫预防  15-18
    1.4 细粒棘球蚴病的综合防治  18-20
  第二章免疫组织化学的研究进展  20-24
    2.1 免疫组织化学的原理与检测系统  20-22
    2.2 免疫组织化学的质量控制与标准化  22-23
    2.3 免疫组织化学在兽医诊断中的应用  23-24
  第三章 Real-Time PCR 的研究进展  24-28
    3.1 实时荧光定量PCR 的原理  24-25
    3.2 实时荧光定量PCR 的分类  25-26
    3.3 实时荧光定量PCR 的应用  26-28
第二部分实验研究  28-65
  引言  28-29
  第四章 EgM9 重组蛋白的表达和纯化实验  29-36
    4.1 材料与方法  29-32
    4.2 结果及分析  32-34
    4.3 讨论  34-36
  第五章 EgM9 蛋白免疫动物实验  36-40
    5.1 材料与方法  36-38
    5.2 结果及分析  38
    5.3 讨论  38-40
  第六章免疫组织化学实验  40-53
    6.1 材料与方法  40-43
    6.2 结果及分析  43-51
    6.3 讨论  51-53
  第七章 Real-Time PCR 实验  53-64
    7.1 材料与方法  53-56
    7.2 结果及分析  56-61
    7.3 讨论  61-64
  第八章结论  64-65
参考文献  65-69
附录  69-71
致谢  71-72
作者简介  72

细粒棘球绦虫感染犬及EgM9蛋白免疫犬引起的免疫应答研究

内容摘要

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