学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

迷迭香酸抑制肾小管上皮-间充质转分化的作用及机制研究

作　者: 蔡闫闫
导　师: 黄松明；张爱华
学　校: 南京医科大学
专　业: 儿科学
关键词: 迷迭香酸 肾小管上皮细胞 上皮-间充质转分化 转化生长因子-β1 线粒体功能
分类号: R692
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 64次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


肾间质纤维化(Renal Interstitial Fibrosis,RIF)已经成为多种肾脏疾病进展到终末期肾病(End-Stage Renal Disease,ESRD)的共同途径和主要病理学改变,可能较肾小球硬化在ESRD中起更重要的作用。病理状态下,肾小管上皮细胞可以发生上皮-间充质转分化(Epithelial-MesenchymalTransition,EMT),在肾间质纤维化过程中约36%的肌成纤维细胞是通过肾小管上皮细胞转分化而来的,因此,EMT在肾间质纤维化过程中扮演着重要的角色。转化生长因子-β1(Transforming Growth Factor-β1,TGF-β1)是最关键的促肾小管间质纤维化的生长因子之一,它能独立启动并完成EMT的全过程。TGF-β1诱导的EMT主要涉及Smad、PI3K、MAPK(ERK/P38/JNK)等信号通路,经进一步研究发现,活性氧簇(ReactiveOxygenSpecies,ROS)参与TGF-β1诱导的EMT信号通路,是MAPK信号通路的上游信号分子。TGF-β1可增加细胞内ROS的生成,促进Smad2、MAPK/P38、胞外信号调节激酶ERK1/2等磷酸化,从而促进EMT的发生。线粒体是ROS产生的主要场所,同时机体内存在抗氧化系统,生成与清除间平衡失调则使ROS积聚;ROS以线粒体为靶点,损伤其功能,加剧ROS生成,形成恶性循环。因此,线粒体功能与ROS关系密切。保护线粒体功能,抑制ROS生成可能成为抑制EMT进展的新的探索方向。迷迭香酸(Rosmarinic Acid,RA)是一种主要从迷迭香、紫苏等唇形科植物中提取的水溶性多酚类化合物单体,具有一系列重要的生物学功能,如抗病毒、抗细菌、抗炎和抗氧化等。研究小组前期研究显示,RA对大鼠系膜增生性肾小球肾炎(Mesangial Proliferative Glomerulonephritis,MsPGN)具有一定的治疗作用,其功能部分基于抗氧化作用,并初步发现RA通过其抗氧化作用可以延缓甚至逆转肾小管间质纤维化,抑制体外培养的肾小管上皮细胞EMT的发生。为进一步论证RA对EMT是否具有抑制作用及其发挥作用的机制,我们进行如下研究,分两部分进行。第一部分迷迭香酸对肾小管上皮-间充质转分化的抑制作用目的:应用转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导小鼠肾小管上皮-间充质转分化(EMT),研究迷迭香酸(RA)对EMT的影响。方法:体外培养小鼠近端肾小管上皮细胞(mouse proximaltu bular cells,mPTCs),细胞同步化后给予RA干预,30min后加刺激剂TGF-β1。实验共分为4组:A.正常对照组;B.25μg/mlRA组;C.5ng/mlTGF-β1诱导组;D.5ng/mlTGF-β1+25μg/mlRA干预组。应用蛋白质免疫印迹(Western blot),反转录聚合酶链反应(RT-PCR),荧光定量RT-PCR(real time quantitive RT-PCR),从蛋白和核酸水平检测E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达情况。结果:正常对照组、RA组E-cadherin表达较高,Vimentin表达很低;TGF-β1刺激后E-cadherin表达下调,Vimentin表达明显上调。TGF-β1+RA干预组E-cadherin与Vimentin表达与正常组相比,无明显差别;RA干预可以部分抑制TGF-β1导致的E-cadherin及Vimentin的改变。结论:迷迭香酸能够部分抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞EMT。第二部分迷迭香酸对EEEMMT过程中线粒体功能的影响目的:探讨TGF-β1诱导的小鼠肾小管上皮细胞EMT过程中线粒体功能的改变,以及RA对线粒体功能的影响。方法:体外培养mPTCs,细胞同步化后给予干预和刺激。实验共分为4组:A.正常对照组;B.25μg/mlRA组;C.5ng/mlTGF-β1诱导组;D.5ng/mlTGFβ1+25μg/mlRA干预组。应用荧光定量RT-PCR技术检测线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)拷贝数;生物发光法检测细胞ATP含量;采用JC-1、DCFDA(2’,7’-Dichlorofluorescein diacetate,DCFDA)荧光染料预染肾小管上皮细胞,荧光显微镜及流式细胞仪检测线粒体膜电位(mitochondrialmembrane potential,ΔΨm)及ROS的变化;应用化学比色法测定琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase,SDH)活性;应用Western blot、荧光定量RT-PCR从蛋白及核酸水平检测线粒体锰超氧化物歧化酶(SOD2)及过氧化物酶体增殖物活化受体γ(Peroxisome proliferator-activedreceptorγ,PPARγ)共激活因子-1α(PPARγcoactivator1α,PGC-1α)表达情况。结果:(1)正常对照组与RA组相比较,各个检测指标均无统计学差异;2()TGF-β1显著增加细胞内ROS水平,RA干预能够部分抑制TGF-β1诱导的ROS生成;(3)RA干预能够部分抑制TGF-β1诱导的mtDNA拷贝数的减少;(4)TGF-β1刺激组ATP水平显著降低,RA干预后再刺激则可使ATP水平升高;(5)RA能够部分恢复TGF-β1引起的SDH活性的减低;(6)RA能够部分恢复TGF-β1引起的线粒体膜电位的下降;(7)RA干预可部分下调TGF-β1诱导的SOD2及PGC-1α的升高。结论:TGF-β1诱导EMT的过程中存在线粒体功能障碍,RA可部分保护线粒体功能从而发挥抑制EMT的作用。

全文目录


中文摘要  4-7
英文摘要  7-11
前言  11-18
第一部分 迷迭香酸对肾小管上皮- 间充质转分化的抑制作用  18-42
  材料与方法  18-35
  结果  35-40
  讨论  40-42
第二部分 迷迭香酸对E MT 过程中线粒体功能的影响  42-63
  材料与方法  43-49
  结果  49-59
  讨论  59-63
全文小结  63-64
参考文献  64-70
综述  70-82
附录一 英文缩略词  82-83
附录二 就读期间科研工作小结  83-84
致谢  84-85

相似论文

  1. 西施舌精子冷冻保存及其冷冻损伤机理研究,S968.3
  2. 茶黄素与TGF-β3对兔骨髓间充质干细胞向软骨细胞增殖和诱导分化地影响,R329
  3. 黄芪丹参药对及其有效组分对肾纤维化JAK/STAT信号途径的干预作用,R285.5
  4. 扶正固本法治疗脓毒症急性虚证患者的临床疗效观察,R278
  5. 早期不全性胆道梗阻对豚鼠oddi括约肌的影响,R657.4
  6. 血清细胞因子及结核抗体对儿童结核病及潜伏性结核感染的诊断价值,R725.1
  7. 外界刺激对牙本质牙髓复合体原位形成和内源性生长因子TGF-β1的影响,R78
  8. 外周血CD4+CD25+Treg细胞、TGF-β1在斑秃患者的表达研究,R758.71
  9. 青蒿琥酯对百草枯致大鼠肺损伤机制的干预性研究,R285.5
  10. 百草枯中毒大鼠血清细胞因子的动态变化及青蒿琥酯的干预,R595.4
  11. 血管性血友病因子裂解酶在肾病综合征患者血浆中的变化和人肾小管上皮细胞上的表达及其影响因素,R692.3
  12. 强脉冲光对TGF-β1诱导的成纤维细胞增殖的影响及ERK抑制剂的作用,R751
  13. BMP2和TGFβ3双基因真核表达载体的构建与鉴定,R87
  14. 中国汉族人群TGF-β1启动子-509C/T基因多态性与帕金森病的相关性的研究,R742.5
  15. 非小细胞肺癌上皮间质转化与转移的关系及其影响因素的初步探讨,R734.2
  16. 氨溴索及伐尼克兰对吸烟诱导的慢性支气管炎大鼠IκBα和TGF-β1表达的影响,R562.21
  17. 外源性TGF-β3对大鼠肝星状细胞内源性TGF-β3表达及其增殖的影响,R363
  18. 血管内皮生长因子及地塞米松对肺泡Ⅱ细胞表达表面活性蛋白B和转化生长因子β1的影响及意义,R363
  19. 脂肪间充质干细胞向髓核样细胞定向分化的分子机制研究,R329
  20. TGF-β与Ras基因在肝癌细胞上皮细胞—间质细胞转化中的作用及机制,R735.7
  21. 尿酸、尿素对HK-2细胞凋亡、纤维化相关因子表达的影响及前列地尔的干预研究,R96

中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 泌尿科学（泌尿生殖系疾病） > 肾疾病
© 2012 www.xueweilunwen.com