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IL-4/STAT6信号转导通路中Igε基因转录抑制分子机制的初探

作　者: 张馨予
导　师: 杨洁；赵秀兰
学　校: 天津医科大学
专　业: 免疫学
关键词: PSF蛋白 STAT6蛋白 STAT6-TAD Igε 组蛋白H3 乙酰化
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

研究目的：STAT6是STATs家族的一员,可被细胞因子IL-4特异性激活。IL-4与其受体结合后,循JAK/STAT6信号转导通路,将活化信号通过蛋白质的相互作用逐级传递,最终激活特异性转录激活因子STAT6并启动靶基因的转录与表达,促进靶蛋白的合成。IL-4/STAT6信号通路的过度活跃参与包括哮喘等变态反应性疾病、肿瘤等多种疾病的进程。大量研究显示STAT6-TAD可结合一系列转录共激活因子p100、CBP和NCoA-1等来提高STAT6介导的转录活性和基因表达水平。但迄今为止,STAT6转录调控的机制尚不明确。PSF蛋白是我们前期通过GST融合蛋白钓取结合质谱分析技术发现的在IL-4刺激后可与STAT6-TAD结合的抑制IL-4/STAT6信号转导通路靶基因之一——Igε基因转录活性的转录抑制因子。本课题的研究目的在于初步探讨PSF抑制Igε基因转录活性的分子机制。方法：本课题分两部分进行：第一部分,PSF与STAT6结合的位点研究,利用免疫共沉淀法的方法确定PSF与STAT6结合的STAT6的功能位点。同时构建含有PSF不同功能片段的真核表达质粒,为进一步研究STAT6与PSF结合的PSF的功能位点提供有力工具。第二部分,用染色质免疫共沉淀的方法验证PSF是否影响STAT6与靶基因Igε启动子结合的能力后,用western blotting检测PSF对组蛋白H3 乙酰化修饰水平的影响。结果：①PSF通过STAT6-TAD与STAT6在细胞内直接结合。并成功构建含有PSF不同功能片段的真核表达质粒。②过表达的PSF可抑制STAT6与Igε启动子的结合能力。③过表达的PSF可抑制组蛋白H3的乙酰化修饰水平。结论：①PSF通过STAT6-TAD与转录激活因子STAT6结合发挥其基因转录抑制作用。②PSF可通过抑制组蛋白H3的乙酰化修饰水平抑制STAT6与Igε启动子结合的能力,从而抑制Igε基因转录活性。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-9
缩略语  9-12
前言  12-19
  研究现状、成果  12-17
  研究目的、方法  17-19
一、PSF蛋白与STAT6蛋白的结合位点研究  19-41
  1.1 对象和方法  19-35
    1.1.1 细胞、质粒与菌种  19
    1.1.2 引物  19-20
    1.1.3 主要试剂  20-22
    1.1.4 主要溶液、缓冲液与培养基  22-25
    1.1.5 主要仪器、设备  25-27
    1.1.6 实验方法及流程  27-35
  1.2 结果  35-39
    1.2.1 过表达STAT6、STAT6-ΔTAD与过表达PSF的细胞内结合实验  35
    1.2.2 PSF各功能片段真核表达质粒的构建  35-39
  1.3 讨论  39-40
  1.4 小结  40-41
二、PSF抑制Igε基因转录活性分子机制的研究  41-52
  2.1 对象和方法  42-47
    2.1.1 细胞和质粒  42
    2.1.2 引物  42
    2.1.3 主要试剂  42
    2.1.4 主要溶液、缓冲液与培养基  42-44
    2.1.5 仪器设备  44
    2.1.6 实验方法及流程  44-47
  2.2 结果  47-50
    2.2.1 PSF影响STAT6与Igε启动子结合能力的ChIP实验  47-48
    2.2.2 IL-4刺激对组蛋白H3 乙酰化修饰水平的影响  48
    2.2.3 IL-4刺激后PSF对组蛋白H3乙酰化修饰水平的影响  48-50
  2.3 讨论  50-51
  2.4 小结  51-52
结论  52-54
  本课题结论  52
  课题展望  52-54
参考文献  54-60
发表论文和参加科研情况说明  60-61
综述  61-76
  PSF的抑癌、致癌双重角色  61-70
  综述参考文献  70-76
致谢  76

IL-4/STAT6信号转导通路中Igε基因转录抑制分子机制的初探

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