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系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞组蛋白H3赖氨酸4三甲化水平的研究

作　者: 张丽
导　师: 戴勇
学　校: 暨南大学
专　业: 内科学
关键词: 系统性红斑狼疮 组蛋白H3赖氨酸4 三甲基化 染色质免疫共沉淀 芯片
分类号: R593.241
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:分析系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)组蛋白H3赖氨酸4三甲基化(H3K4me3)水平,探讨SLE发病机理。方法:根据SLEDAI评分标准把SLE病人分为活动期和稳定期两组,并选取类风湿关节炎(RA)和健康者分别作为疾病对照组和健康对照组。梯度密度离心法分离10例SLE活动期患者、7例SLE稳定期患者、8例RA和8例健康者的PBMCs,采用染色质免疫共沉淀联合芯片技术(ChIP-chip)在全基因组范围内对SLE患者的PBMCs组蛋白H3K4me3进行高通量的筛选。染色质免疫共沉淀-实时定量聚合酶联反应(ChIP-qPCR)验证芯片结果。定量反转录聚合酶联反应(qRT-PCR)检测H3K4me3显著差异基因的mRNA表达水平。DNA甲基化免疫共沉淀-实时定量聚合酶联反应(MeDIP-qPCR)检测H3K4me3显著差异基因的DNA甲基化状态。结果:(1) 10例SLE活动期患者与8例健康对照比较,鉴定出413个探针存在H3K4me3显著差异,其中137个探针显示H3K4me3程度增高,276个探针H3K4me3程度降低;与8例RA对照比较,鉴定出236个探针存在H3K4me3显著差异,其中169个探针显示H3K4me3程度增高,67个探针H3K4me3程度降低。10例SLE活动期与7例稳定期患者比较,显示270个探针存在H3K4me3显著差异,其中151个探针显示H3K4me3程度增高,119个探针H3K4me3程度降低。7例SLE稳定期患者与健康对照比较,发现393个探针存在H3K4me3表达差异,其中有112个基因H3K4me3程度增高,281个探针H3K4me3程度降低;与8例RA对照比较,发现202个探针存在H3K4me3显著差异,其中139个探针显示H3K4me3程度增高,63个探针H3K4me3程度降低。RA患者与健康对照相比较,鉴定出364个探针存在H3K4me3显著差异,其中有66个探针显示有H3K4me3程度增高,298个探针有H3K4me3程度降低。(2) ChIP-qPCR验证结果与CpG岛芯片的结果相一致。H3K4me3改变与DNA甲基化存有反比关系。结论:SLE患者PBMCs组蛋白H3K4me3水平较对照组存在显著差异。H3K4me3差异基因参与SLE发病。这些新型差异基因可作为潜在的生物标记物和治疗靶点。ChIP-chip技术有利于进一步揭示SLE分子机制,发现新的治疗靶点。

全文目录


中文摘要  4-5
英文摘要  5-7
目录  7-8
1 前言  8-15
  1.1 研究背景及意义  8-11
  1.2 表观遗传修饰与作用  11-14
  1.3 组蛋白甲基化、DNA甲基化与SLE的关系  14
  1.4 ChIP-chip技术原理  14-15
2 实验材料  15-19
  2.1 样本  15
  2.2 主要仪器  15-16
  2.3 主要试剂  16-18
  2.4 溶液配制  18-19
3 实验方法  19-35
  3.1 淋巴细胞分离  19
  3.2 染色质免疫共沉淀联合芯片技术(ChIP-chip)  19-25
  3.3 染色质免疫共沉淀-荧光定量聚合酶联反应(ChIP-qPCR)  25-27
  3.4 荧光定量逆转录PCR  27-31
  3.5 DNA甲基化免疫共沉淀-荧光定量聚合酶联反应(MeDIP-qPCR)  31-35
  3.6 统计学方法  35
4 结果  35-49
  4.1 CpG岛芯片数据分析和监测  35
  4.2 SLE活动期患者与健康者的组蛋白H3K4me3比较  35
  4.3 SLE稳定期患者与健康者的组蛋白H3K4me3比较结果  35-36
  4.4 SLE活动期和稳定期患者的组蛋白H3K4me3比较结果  36
  4.5 SLE活动期和RA患者的组蛋白H3K4me3比较结果  36
  4.6 SLE稳定期与RA患者的组蛋白H3K4me3比较结果  36
  4.7 RA患者与健康者的组蛋白H3K4me3比较结果  36
  4.8 ChIP-qPCR结果  36
  4.9 荧光定量逆转录CPR结果  36
  4.10 MeDIP-qPCR结果  36-49
5 讨论  49-51
6 结论  51
参考文献  51-56
缩略词表  56-57
附图  57-66
在校期间发表论文  66-67
致谢  67

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 全身性疾病 > 免疫性疾病 > 自身免疫性疾病、结缔组织疾病 > 红斑狼疮 > 系统型红斑狼疮
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