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抗真菌活性放线菌的多相分类鉴定及代谢产物的初步分析

作　者: 陈冬梅
导　师: 何建勇
学　校: 沈阳药科大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 放线菌 16S rDNA 抗真菌抗生素 菌种鉴定 发酵条件 分离纯化
分类号: R379
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 43次
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内容摘要


本文采用琼脂扩散法从29株土壤放线菌中筛选出了2株具有较强抗真菌活性的菌株(P-127及1043)。采用多相分类方法对放线菌P-127及1043进行了鉴定,结果表明：菌株P-127的16SrDNA序列(获得的gene bank登记号为EU797798)与Streptomyces padanus有着最相近的进化关系,序列完全相同(同源性达100%),因此确定菌株P-127为Streptomyces padanus;菌株1043的16S rDNA(获得的gene bank登记号为EU864307)与许多链霉菌的16S rDNA序列有着高度同源性,确定该菌株为一株链霉菌。为了提高活性代谢产物的产量,对P-127及1043的基本发酵条件进行了考察。通过杯碟法检测不同条件下发酵液中抗生素的产量,确立了最适摇瓶发酵条件：(1)菌株P-127为种龄34h,接种量10%,摇瓶装液量40ml/250ml三角瓶,发酵周期为4天。(2)菌株1043为种龄40h,接种量10%,摇瓶装液量50ml/250ml三角瓶,发酵周期为6天。对菌株P-127及1043发酵液中的活性物质进行了热、酸碱稳定性研究；针对P-127菌体的活性代谢产物进行了pH纸层析、八种溶剂系统纸色谱试验,为初步确定该活性物质的理化特性提供了依据。采用大孔吸附树脂对P-127菌体的活性代谢产物进行分离,得到粗品。再利用制备型高效液相进一步分离纯化,获得了抗真菌活性物质的结晶,纯度较高,经分析型高效液相色谱法检测含量超过97%,质谱显示该活性物质的分子量为670,紫外吸收波谱显示该活性物质具有多烯大环内酯类抗生素的特征吸收峰,结合该菌株的多相分类鉴定和文献检索,提示该活性物质可能是fungichromin。

全文目录


中文摘要  10-11
ABSTRACT  11-12
第一章 前言  12-28
  1.1 农药发展的必然趋势——生物农药  12-16
    1.1.1 农药分类  12-13
    1.1.2 化学农药的危害和发展受限  13
    1.1.3 生物农药的研究和应用进展  13-16
  1.2 农用抗生素的研究进展  16-18
    1.2.1 农用抗生素的开发模式  17
    1.2.2 农用抗生素的筛选策略  17-18
  1.3 放线菌的研究现状  18-26
    1.3.1 放线菌的分类鉴定研究  18-22
    1.3.2 放线菌的分离  22
    1.3.3 拮抗放线菌的筛选  22-23
    1.3.4 放线菌来源的抗菌活性物质研究  23-26
  1.4 本文立题依据  26-28
第二章 抗真菌活性菌株的筛选  28-33
  2.1 材料  28-29
    2.1.1 菌种  28
    2.1.2 试剂  28
    2.1.3 实验仪器  28-29
    2.1.4 主要培养基  29
  2.2 方法  29-31
    2.2.1 活化菌株  29-30
    2.2.2 发酵液的制备  30
    2.2.3 抑菌活性测定  30-31
  2.3 结果与讨论  31-33
    2.3.1 活性菌株的生长情况  31
    2.3.2 抑菌活性检测结果  31-32
    2.3.3 目的菌株的确定  32-33
第三章 菌株P-127及1043的多相分类鉴定  33-48
  3.1 材料  33-36
    3.1.1 菌种  33
    3.1.2 主要试剂  33-34
    3.1.3 主要仪器  34
    3.1.4 培养基  34-36
  3.2 方法  36-41
    3.2.1 形态及培养特征观察  37
    3.2.2 生理生化特性测定  37
    3.2.3 菌株P-127及1043的16SrDNA序列测定  37-41
  3.3 结果与讨论  41-48
    3.3.1 形态及培养特征观察  41-42
    3.3.2 生理生化测定结果  42-43
    3.3.3 菌株P-127及1043的16SrDNA序列测定分析  43-46
    3.3.4 鉴定结论  46-48
第四章 菌株P-127及1043抗真菌活性物质理化特性与结构的初步分析  48-72
  4.1 材料  48-49
    4.1.1 菌种  48
    4.1.2 主要试剂  48
    4.1.3 主要仪器  48
    4.1.4 主要培养基  48-49
  4.2 方法  49-55
    4.2.1 菌株P-127及1043的发酵培养  49-50
    4.2.2 菌株P-127及1043发酵液的预处理  50
    4.2.3 发酵液热、酸碱稳定性研究  50
    4.2.4 活性物质的初步检测与理化性质的考察  50-53
    4.2.5 菌株P-127活性物质的分离纯化  53-55
  4.3 结果与讨论  55-72
    4.3.1 菌株P-127及1043发酵条件的初步研究  55-60
    4.3.2 发酵液热、酸碱稳定性研究  60-62
    4.3.3 菌株P-127及1043抗真菌活性物质的初步研究  62-72
第五章 结论  72-74
参考文献  74-78
致谢  78

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 病原真菌（霉菌）与放线菌
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