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重组乙酰胆碱受体α亚单位-BirA识别多肽序列基因的构建与表达

作　者: 陈秋艳
导　师: 孟繁平
学　校: 延边大学
专　业: 病原生物学
关键词: BirA识别多肽序列基因乙酰胆碱受体重症肌无力
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:构建重组乙酰胆碱受体α亚单位-BirA识别多肽序列基因(pcDNA3.1-AChRα-BirA)并对其进行真核基因表达。方法:设计引物生物素蛋白连接酶(BirA)识别多肽序列基因。将载体pcDNA3.1-AChRα经限制性核酸内切酶EcoRv单酶切后,用低熔点琼脂糖凝胶电泳回收并纯化,与BirA识别多肽序列基因连接。将连接产物转化至感受态细胞E.coli DH5α并扩增,再用EcoRv单酶切检查BirA识别多肽序列基因插入的正确性,并测序验证,然后将构建成功的载体在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达。表达产物以绿色荧光标记,经激光扫描共聚焦显微镜验证。结果:电泳检查发现了大小为63 bp的条带,并测序验证了插入的基因序列为BirA识别多肽序列基因。转染后,经激光扫描共聚焦显微镜可观察到CHO细胞膜上的绿色荧光。结论:成功构建了AChRα-BirA识别多肽序列基因重组载体,并在CHO细胞中很好表达。本实验为下一步构建AChRα四聚体并作为抗原检测乙酰胆碱受体抗体奠定了基础。

全文目录

摘要  6-7
Abstract  7-9
第一章前言  9-12
第二章实验材料  12-17
  2.1 实验仪器  12-13
  2.2 实验试剂  13-14
  2.3 菌种、载体和细胞  14
  2.4 培养基的制备  14-15
  2.5 溶液的配制  15-17
第三章实验方法  17-25
  3.1 E.coli DH5α菌种的复苏  17
  3.2 氯化钙法制备感受态细胞  17
  3.3 质粒pcDNA3.1-AChRα的细菌转化  17-19
  3.4 引物设计与合成  19
  3.5 构建pcDNA3.1-AChRα-BirA多肽识别序列基因载体  19-23
  3.6 pcDNA3.1-AChRα-BirA多肽识别序列基因载体在CHO细胞的表达  23-25
第四章结果  25-30
第五章讨论  30-33
结论  33-34
参考文献  34-36
致谢  36-37
综述  37-47
  参考文献  43-47

重组乙酰胆碱受体α亚单位-BirA识别多肽序列基因的构建与表达

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