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离体诱导与培养紫锥菊不定根产生菊苣酸的研究

作　者: 雷思琦
导　师: 彭菲
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 紫锥菊不定根菊苣酸离体培养秋水仙素
分类号: S567.239
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

菊苣酸(cichoric acid),为咖啡酸衍生物,又称二咖啡酸酒石酸,具有提高人体免疫力和抗肿瘤等药理作用,紫锥菊(Echinacea purpurea Moench)为其主要的植物来源。我们对紫锥菊的各用药部位,叶片、叶柄、根、全草进行菊苣酸含量比较,发现紫锥菊根中菊苣酸含量最高。为此,我们对根进行了离体培养研究,以期从中获得高含量的菊苣酸。本研究以紫锥菊种子为材料获得试管苗,再以试管苗的根为外植体直接诱导产生不定根,并对影响不定根生长和菊苣酸含量的一些因素进行了系统的考察。研究内容与结果如下：1.紫锥菊种子发芽的最佳方法为种子用0.05%MnSO4于40℃的水浴浸泡2h后,接种于MS+6-BA0.3培养基中培养。2.紫锥菊不定根最佳诱导配方为1/2MS+IBA2.0+蔗糖30g/L；最佳增殖培养基为1/2MS+IBA2.0+30g/L蔗糖。液体培养所用培养基与固体培养相同。3.在光照条件下,无论是不定根的生长速度还是次生代谢产物菊苣酸的合成都比黑暗条件下快。但是,不定根诱导初期在黑暗条件下更利于其诱发。所以综合比较得出：不定根诱导先在黑暗条件下培养7d后再移入光照培养箱中24h连续光照培养。4.光照对颜色的影响：光照条件下不定根呈紫色,而在黑暗条件下不定根呈黄白色；愈伤组织在每日14h光照下呈黄白色,而在24h连续光照下表面呈现紫色。5.秋水仙素对紫锥菊不定芽进行变异处理的最佳浓度和时间为0.05%,12h。处理后的植株与未处理植株相比,其叶片明显增厚；不定根明显变粗；菊苣酸含量也高于同期未处理培养物。6.培养物的菊苣酸含量比较：(1)用药部位：不定根最高,其次为全草,再次为愈伤组织；(2)愈伤组织：根据外植体来源,根最高,其次为叶片,叶柄最低；根据颜色,紫色愈伤组织高于黄白色愈伤组织；(3)根：变异不定根最高,其次为正常不定根,栽培根最低；(4)光照时间：24h最高,8h最低。可见光照时间越长,越有利于菊苣酸的积累。本研究以紫锥菊根为外植体不经愈伤组织阶段直接诱导出不定根,并对影响不定根生长和菊苣酸积累的因素进行了较为系统性的考察,初步建立了一条通过紫锥菊不定根离体诱导培养而产生菊苣酸的路径。

全文目录

中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-13
第一章材料与方法  13-21
  1.1 实验材料  13
  1.2 主要仪器与论文中的缩写解释  13-14
  1.3 实验方法  14-19
    1.3.1 紫锥菊试管苗的获得  14
    1.3.2 愈伤组织诱导与增殖  14-15
    1.3.3 紫锥菊不定根的诱导  15-16
    1.3.4 紫锥菊不定根的增殖  16-17
    1.3.5 秋水仙素处理对不定根生长的影响  17-19
  1.4 分析方法  19-21
    1.4.1 不定根重量测定  19
    1.4.2 菊苣酸含量测定  19-21
第二章结果与分析  21-35
  2.1 紫锥菊试管苗的获得  21-22
    2.1.1 MnSO_4对种子发芽率的影响  21
    2.1.2 6-BA对种子发芽率的影响  21-22
  2.2 光照对愈伤组织颜色的影响  22
  2.3 紫锥菊不定根的诱导与增殖  22-30
    2.3.1 紫锥菊不定根的诱导  22-26
    2.3.2 紫锥菊不定根增殖  26-28
    2.3.3 秋水仙素处理对不定根生长的影响  28-30
  2.4 成分分析结果  30-35
    2.4.1 方法学考察  30-31
    2.4.2 成分含量比较  31-35
第三章讨论  35-39
  3.1 各种理化因子对紫锥菊不定根诱导的影响  35
    3.1.1 盐强度对不定根的影响  35
    3.1.2 蔗糖浓度对不定根的影响  35
  3.2 培养时间长短与菊苣酸含量的关系  35-36
  3.3 光照与培养物颜色、菊苣酸含量的关系  36-37
  3.4 秋水仙素诱变处理与菊苣酸含量的关系  37-38
  3.5 创新点  38-39
第四章结论与展望  39-40
附图  40-42
致谢  42-43
参考文献  43-46
附录1 菊苣酸的研究进展  46-54
附录2 攻读硕士学位期间发表的论文  54

离体诱导与培养紫锥菊不定根产生菊苣酸的研究

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