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非洲菊品种‘靓粉’的离体培养及脱毒技术研究
作 者: 浮双双
导 师: 吕长平
学 校: 湖南农业大学
专 业: 观赏园艺
关键词: 非洲菊 离体培养 脱毒 病毒唑
分类号: S682.11
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
非洲菊品种‘靓粉’,花色艳丽、花枝挺拔、切花率高、保鲜期长,具有非常高的观赏价值。非洲菊采用离体培养的方法快速繁殖,不仅能在短时间内大量繁殖优良种苗,而且还避免了分株繁殖和种子繁殖所带来的品种退化问题;在非洲菊生长过程中易受到病毒危害,严重影响到非洲菊切花品质和产量。所以本试验研究的目的是针对‘靓粉’的离体培养与脱毒技术两方面的问题,对保持‘靓粉’的优良种质资源与优良性状的稳定、提高其观赏价值有重要意义。1以无病虫害的‘靓粉’母株为材料,选取花托、茎尖、叶柄为外植体,以MS为基本培养基,附加不同浓度的6-BA. NAA,诱导外植体产生愈伤组织,继而分化出芽;然后以生根培养基进行诱导生根;后将组培苗移栽于不同基质中,筛选最适合的培养基质。2对日光温室的生产植株和以花托为外植体的组培苗分别进行番茄黑环病毒(Tomato black ring virus,TBRV)、烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus, TRV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus, TSWV) 5种非洲菊易感染病毒进行RT-PCR检测,结果显示两种来源的材料都只携带烟草花叶病毒。3以‘靓粉’组培苗为材料,采用茎尖组织脱毒、茎尖病毒唑(三氮唑核苷)处理脱毒、花托组织病毒唑处理脱毒、热处理脱毒、病毒唑+热处理脱毒5种脱毒处理。采用RT-PCR技术对处理后组培苗进行检测,试验结果显示,用茎尖组织脱毒和茎尖病毒唑(三氮唑核苷)处理脱毒对非洲菊‘靓粉’脱毒达到100%,花托组织病毒唑5mg/L培养基处理后组培苗脱毒率达到85%,而热处理后组培苗表现出不适应性。
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全文目录
摘要 4-5 Abstract 5-10 第一章 前言 10-23 1 非洲菊研究进展 10-20 1.1 非洲菊离体培养研究进展 10-13 1.1.1 外植体的选取 10-11 1.1.2 激素 11-12 1.1.3 糖类 12-13 1.1.4 褐变现象研究 13 1.2. 非洲菊病毒检测研究进展 13-20 1.2.1 植物病毒检测方法研究进展 13-15 1.2.2 非洲菊主要病毒研究进展 15-20 2 观赏植物脱毒技术研究进展 20-22 2.1 茎尖培养脱毒 20-21 2.2 热处理脱毒 21 2.3 化学药剂脱毒 21-22 2.4 低温处理脱毒 22 2.5 其他脱毒方法研究 22 3 前景展望 22 4 本研究的目的意义 22-23 第二章 非洲菊‘靓粉’的离体培养技术研究 23-28 1 供试材料 23 2 试验方法 23-25 2.1 外植体处理 23-24 2.2 愈伤组织诱导和分化 24 2.2.1 花托组织外植体 24 2.2.2 叶片和叶柄外植体 24 2.2.3 茎尖外植体 24 2.3 生根培养 24 2.4 试管苗的移栽驯化 24-25 2.5 数据统计 25 3 结果与分析 25-27 3.1 愈伤组织诱导分化结果 25-26 3.1.1 花托 25 3.1.2 叶柄 25 3.1.3 茎尖 25-26 3.1.4 叶片 26 3.2 生根培养 26-27 3.3 移栽驯化 27 4 小结 27-28 第三章 非洲菊‘靓粉’日光温室生产植株和组培苗的病毒检测 28-37 1 试验材料和设备 28-29 1.1 试验材料 28 1.2 试验所用仪器和试剂 28-29 2 试验方法 29-35 2.1 RT-PCR引物设计 29 2.2 总RNA的提取 29-30 2.2.1 提取前准备 29-30 2.2.2 叶片RNA提取 30 2.3 非洲菊5种主要病毒的RT-PCR 30-34 2.3.1 烟草花叶病毒(TMV)RT-PCR 30-31 2.3.2 黄瓜花叶病毒(CMV)RT-PCR 31-32 2.3.3 番茄黑环病毒(TBRV)RT-PCR 32 2.3.4 烟草脆裂病毒(TRV)RT-PCR 32-33 2.3.5 番茄斑萎病毒(TSWV)RT-PCR 33-34 2.4 琼脂糖凝胶制备 34-35 2.4.1 琼脂糖凝胶的特点 34 2.4.2 凝胶的制备 34-35 3 结果与分析 35-37 3.1 总RNA的提取 35 3.2 RT-PCR扩增 35-37 第四章 非洲菊‘靓粉’脱毒技术研究 37-44 1 试验设备与试剂 37-38 2 试验方法 38-40 2.1 茎尖组织脱毒 38 2.2 茎尖病毒唑处理脱毒 38 2.3 花托组织病毒唑处理脱毒 38-39 2.4 热处理脱毒 39 2.5 病毒唑与热处理脱毒 39-40 3 脱毒处理后结果与分析 40-41 3.1 茎尖组织脱毒与茎尖组织病毒唑处理脱毒 40 3.2 花托组织病毒唑处理脱毒 40 3.3 热处理处理脱毒 40-41 4 脱毒效果检测 41-42 4.1 TMV的RT-PCR检测 41-42 4.2 检测结果 42 5 讨论 42-44 第五章 全文总结 44-46 1 结论 44 2 创新点 44 3 展望 44-46 参考文献 46-52 附图 52-55 致谢 55-56 作者简历 56
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中图分类: > 农业科学 > 园艺 > 观赏园艺(花卉和观赏树木) > 多年生花卉类 > 宿根花卉类 > 菊花
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