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淫羊藿苷逆转耐氨甲喋呤肺癌A549细胞转移表型的研究

作　者: 吴剑锋
导　师: 沈佐君
学　校: 安徽医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 氨甲蝶呤 A549细胞 对映体 耐药性 肿瘤 癌 非小细胞肺 淫羊藿苷 甲氨蝶呤 抗药性,肿瘤 肿瘤转移
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 55次
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内容摘要


第一部分:氨甲蝶呤耐药A549细胞株的建立及其生物学特征目的:诱导并建立耐氨甲蝶呤对映体的A549细胞株并观察耐药细胞系(L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549)的生物学特性。方法:以MTX对映体为诱导剂,采用浓度递增结合低剂量持续诱导方法诱导A549细胞株,建立MTX不同对映体耐药细胞系;倒置相差显微镜观察细胞形态变化; MTT法绘制细胞生长曲线;MTT法检测耐药细胞株的耐药指数;流式细胞仪检测细胞周期和细胞的分裂增殖能力。结果:采用浓度递增结合低剂量持续诱导方法,建立了MTX不同对映体对A549细胞的耐药细胞株,L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549耐药指数分别为6.0的和20.2。倒置相差显微镜观察细胞形态发生了改变;细胞生长曲线显示D-(-)-MTX/A549的增值略慢于亲本细胞,而L-(+)-MTX/A549的增值最慢;流式细胞仪检测细胞周期结果显示L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549耐药细胞株S期细胞数量减少(P < 0. 05),G0 / G1期细胞增多( P < 0. 05);CFSE检测A549、L-(+)-MTX/A549、D-(-)-MTX/A549的MFI分别为6.08±0.55、7.72±0.30、6.90±0.18。两对映体细胞株间有明显手性差异。结论:本研究建立了MTX两种对映体耐药细胞株并观察了耐药株细胞的生物学特性,为进一步研究氨甲蝶呤两种对映体的耐药机制提供了一种实验模型。第二部分:淫羊藿苷逆转耐氨甲喋呤肺癌A549细胞转移表型的研究目的:研究中药淫羊藿苷(icariine,ICA)作用MTX肺癌A549耐药细胞后对细胞转移表型的影响,初步探讨ICA逆转A549/MTX耐药细胞转移表型的作用机制及对肺癌的治疗价值。方法:采用MTT法检测ICA对A549/MTX耐药细胞的半数抑制浓度(IC50);采用双层软琼脂克隆形成实验检测A549/MTX组、A549/MTX+ICA组细胞的克隆形成率并观察其集落形态;细胞划痕实验检测A549/MTX组、A549/MTX+ICA组细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力变化;RT-PCR检测A549/MTX细胞和A549/MTX +ICA细胞中c-myc、nm23-H1基因mRNA水平的变化。结果:MTT结果显示无毒剂量的ICA与MTX联合应用后A549/MTX细胞的IC50值为35.50±1.85μmol/L,比单独应用MTX(同等剂量)后A549/MTX细胞的IC50值(52.17±2.25μmol/L)有了一定程度的下降;软琼脂实验发现A549/MTX+ICA组细胞克隆形成率为0.94±0.088,小于A549/MTX组细胞的1.56±1.065(P<0.05);划痕实验显示72 h后A549/MTX组细胞的迁移能力大于A549/MTX+ICA组细胞(P<0.05);Transwell小室实验显示A549/MTX组细胞的穿膜细胞数明显多于A549/MTX+ICA组细胞(P<0.05),说明A549/MTX+ICA组细胞的侵袭浸润能力小于A549/MTX组细胞;A549/MTX+ICA组细胞相对于A549/MTX组细胞,nm23-h1的mRNA表达水平明显升高,c-myc的mRNA表达明显减少。结论:中药ICA具有逆转A549/MTX耐药细胞转移表型的作用。

全文目录


英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
正文  11-35
  第一部分:氨甲蝶呤耐药 A549 细胞株的建立及其生物学特征  11-20
    1 前言  11
    2 材料与方法  11-13
    3 结果  13-16
    4 讨论  16-17
    5 结论  17-18
    6 参考文献  18-20
  第二部分:淫羊藿苷逆转耐氨甲喋呤肺癌 A549 细胞转移表型  20-35
    1 前言  20
    2 材料与方法  20-25
    3 结果  25-31
    4 讨论  31-32
    5 结论  32-33
    6 参考文献  33-35
附录  35-36
致谢  36-37
综述  37-45
  参考文献  43-45

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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