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塔河胡杨林树叶褐色斑点病原菌的分离鉴定及一株新种的分类学鉴定

作　者: 肖婷
导　师: 艾尔肯·热合曼
学　校: 新疆大学
专　业: 微生物
关键词: 塔河胡杨林树叶褐色斑点病病原菌分离鉴定鞘氨醇杆菌
分类号: S763.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

1胡杨是杨属中最原始、最古老的树种,具有抗热、抗寒、抗风沙、抗盐碱、抗旱和抗瘠薄的特性,因此在维持干旱和半干旱地区的生态系统平衡中具有重要作用。塔里木河流域胡杨林是目前全世界最大的一片天然胡杨林,其面积近30万公顷,它约占全国胡杨林总面积的90%和全世界胡杨林总面积的55%以上,是极其珍贵的自然资源。胡杨叶褐色斑点病,该病在塔河胡杨林中普遍发生。患褐色斑点病的塔河胡杨树的叶片在8月份开始出现浅褐色的斑点,斑点边缘不规则,其后斑点面积逐渐增大,颜色逐步变为深褐色或者接近黑色,使病情严重的植株所有枝杆上的树叶干枯和过早落叶,对树木的正常生长、营养物质的积累等都将产生巨大的危害,加剧了胡杨林的衰败进程。有关杨树病原性微生物的研究较多,对胡杨林造成危害的研究报道比较欠缺。本文以新疆塔里木河流域胡杨叶褐色斑点病病害为研究对象,对其进行病原菌的分离与鉴定。并进行回接感染实验,确定胡杨叶褐色斑点病的病原菌。真菌的鉴定依据其形态特征、28S rDNA D1/D2区碱基序列比对、系统进化分析、致病性测定等。细菌的鉴定依据其形态特征和生理生化特性、16S rDNA序列分析、系统进化分析、致病性测定。本实验共分离到菌株33株,其中鉴定出32株:细菌24株,包括芽孢杆菌16株,考克斯菌2株,节杆菌2株,假单胞菌、微球菌、短杆菌和Oceanobacillus各1株;真菌8株,包括青霉菌4株,曲霉2株,链格孢1株,Quambalaria 1株。回接结果表明菌株编号为X-9是引起胡杨叶褐色斑点病的主要病原菌,根据其形态特征、28S rDNA D1/D2区碱基序列比对、系统进化分析等结果菌株X-9属于Quambalaria属,与Quambalaria simpsonii GQ303321.1的相似率为99%,因此菌株X-9命名为Quambalaria simpsonii X-9。2对一株潜在新种XH4采用形态特征、生理生化测定、细胞化学组分分析、DNA(G+C)mol%测定、16S rDNA序列分析、系统进化分析等多项分类技术对其进行系统的分类研究。菌株XH4为革兰氏阴性,严格需氧,不形成孢子,不具运动型,短杆状,大小为0.6-1.0μm×1.0-1.5μm。菌落在LB培养基上为黄色,圆形凸起。能在20-45℃范围内生长,最适温度为30-37℃;能在pH值6.0-9.0范围内生长,最适pH值为6.0-8.0;能在NaCl浓度0-3% (w/v)范围内生长。过氧化氢酶,氧化酶阳性。16S rDNA序列相似性结果显示,与菌株XH4的相似性最高的模式菌株是Sphingobacterium mizutaii ATCC 33299T相似率为96.02%,16S rDNA序列在GenBank注册号为FJ859899。MK-7为主要的甲基萘醌类型。主要的脂肪酸为iso-C15:0 (34.02%),summed feature 3 (C16:1ω7c and/or C16:1ω6c, 20.73%)和iso-C17:0 3-OH (14.74%)。DNA G+C摩尔百分含量为41.2mol%。通过表型特征,遗传型特征和化学分类学相结合的多相分类研究,确定菌株XH4为鞘氨醇杆菌属的一个新种,命名为Sphingobacterium hotanense,作为典型菌株,在中国和美国典型菌种保藏中心的保藏号分别为:CCTCC AB 209007和NRRL B-59204。

塔河胡杨林树叶褐色斑点病原菌的分离鉴定及一株新种的分类学鉴定

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