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金针菇和灵芝药用成分获取技术的优化

作　者: 张颂
导　师: 刘立侠
学　校: 东北师范大学
专　业: 植物学
关键词: 灵芝金针菇免疫调节蛋白深层发酵重组表达生理学功能
分类号: S567.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

灵芝是一种著名的药用真菌,它对于肿瘤病辅助治疗、慢性支气管炎、冠心病、肝炎、高血脂症、神经衰弱、皮肌炎等疾病均有不同程度的疗效。金针菇作为一种药食兼用的真菌,可预防和治疗肝炎、胃肠溃疡,并具有抗癌、降低血清胆固醇的作用。传统培养这两种真菌的方法费时费力,且品质不易控制。随着现代科学生产的发展,采用液体深层发酵技术可以对这两种真菌进行大规模生产,具有生产量大、占地少、周期短,生产过程易于控制等优点。从这两种真菌中提取的具有免疫调节功能的小分子蛋白——真菌免疫调节蛋白,具有凝集血细胞的生物活性,同时也表现出促进淋巴细胞增殖,诱导免疫细胞分泌多种细胞因子等免疫调节活性。本论文对灵芝和金针菇菌丝体的液体深层发酵工艺进行了初步的研究。将两种菌丝体在以花生和大豆为不同氮源配比的培养基中培养,检测两种菌丝体在摇瓶和静止培养板两种不同培养方式中的生长状况及干鲜重比较,对在六种不同培养基中培养的两种菌丝体的生物学特性进行了测定。试验结果表明,静止培养的两种菌丝体干、鲜重明显高于摇瓶培养;静止培养下,花生培养基中的菌丝体中总蛋白含量略高于大豆培养基、总糖含量基本等同于大豆培养基中,但每升花生培养基的成本高于大豆培养基。因此优化的液体深层发酵菌丝体培养基为含有20g/L大豆粉的培养基。以毕赤酵母为宿主进行了金针菇免疫调节蛋白的重组表达,通过苯酚-硫酸法对重组蛋白纯品糖含量的分析表明,重组真菌免疫调节蛋白在酵母表达载体中可能发生了糖基化修饰。经过优化重组蛋白诱导表达技术和纯化技术,获得了高表达和高纯度的重组金针菇免疫调节蛋白。对纯化后的重组金针菇免疫调节蛋白进行了生物学活性检测,结果表明,重组蛋白具有凝集血细胞的活性和促进小鼠淋巴细胞增殖的活性。本论文对灵芝和金针菇液体深层发酵的培养基进行了优化,同时也对重组金针菇免疫调节蛋白的重组表达技术进行了优化。本实验结果为灵芝和金针菇的液体深层发酵生产开发提供了一定的实验依据,也为真菌免疫调节蛋白的进一步实验研究提供了一定的理论基础。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-7
1 引言  7-14
  1.1 灵芝和金针菇的药用价值  7-8
  1.2 灵芝和金针菇深层发酵研究进展  8-9
  1.3 真菌免疫调节蛋白的生物学功能  9-12
  1.4 灵芝和金针菇免疫调节蛋白的重组表达  12
  1.5 本实验的研究目的和主要研究内容  12-14
2 材料和方法  14-21
  2.1 实验材料  14-15
  2.2 实验方法  15-21
    2.2.1 灵芝和金针菇的深层发酵工艺  15-18
    2.2.2 金针菇免疫调节蛋白的工程菌表达  18-21
3 结果与分析  21-32
  3.1 灵芝和金针菇菌丝体的液体培养工艺  21-27
  3.2 金针菇免疫调节蛋白的重组表达技术优化  27-29
  3.3 重组蛋白pPIC9-FIP-fve的纯化  29-30
  3.4 重组蛋白pPIC9-FIP-fve的糖含量检测  30
  3.5 重组金针菇免疫调节蛋白的生理学功能检测  30-32
4 讨论  32-35
  4.1 灵芝和金针菇的深层发酵培养方法的选择  32-33
  4.2 重组金针菇免疫调节蛋白表达技术及生理学功能  33-35
5 结论  35-36
参考文献  36-39
致谢  39

金针菇和灵芝药用成分获取技术的优化

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