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乳真蛋白和尿素与铵态氮检测方法研究

作　者: 朱秀高
导　师: 王捍东
学　校: 扬州大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 乳真蛋白尿素氮铵态氮微量Lowry法酶解-Berthelot法
分类号: TS252.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目前,人们对乳制品的需求量越来越大,而作为乳制品基本来源的原料乳供应却呈明显短缺态势。在此情况下,一些不法者为了自身利益而非法向原料乳中加入其他外源物质,获取不正当利益。当前牛奶的掺假主要针对乳蛋白成分,使用的掺假物质主要包括缩二脲、三聚氰胺等化工原料、尿素、硫酸铵等农用化肥。引起这种掺假现象蔓延的原因主要在于现有蛋白检测技术的缺陷以及掺假物质检测方法的局限性。本研究针对目前乳品业发展中存在的上述状况,分别对乳真蛋白(TP)和尿素氮与铵态氮检测方法及其检测体系进行了研究。其中乳TP的检测通过建立微量化Lowry反应体系进行,尿素氮和铵态氮的检测通过建立酶解-Berthelot反应体系进行。研究中对每种反应体系建立过程中所涉及到的主要问题进行了实验摸索,并依据方法学要求,对建立的每种反应体系从各主要方面进行了详细评价。实验结果表明,两种反应体系分别可以准确、高效、灵敏的对乳TP和尿素氮与铵态氮总量进行测定,酶解-Berthelot体系还能分别定量尿素氮与铵态氮浓度。各检测体系的主要特点如下：微量化Lowry反应体系在自动分析应用中,其TP测定结果准确性高,与凯氏定氮法(不添加无机含氮物质、有机非蛋白质含氮物质时)间无显著性差异；反应体系中样品液蛋白浓度为10～100μg/mL线性良好,最低检测浓度为5μg；可以将乳样做500倍稀释后直接测定,乳蛋白含量在0.5～5.0g/100g时可准确定量。方法在不同样品、不同测定时间内的重复性良好；乳中可能存在或人为添加的叠氮化钠、碳酸氢钠、硫酸钠、尿素、三聚氰胺、硫酸铵、盐酸羟胺、硫脲、亚硝酸盐、蔗糖和氯化钠等不会对测定结果产生干扰,重铬酸钾只有在浓度超过10mg/mL时,才对反应产生影响,其能使反应结果升高。酶解-Berthelot法测定乳中尿素氮与铵态氮,在0.5～400mg N/100g范围内可准确定量(即尿素1.073mg/100g～0.858g/100g或硫酸铵2.36mg/100g～1.888g/100g,相当于3.125 mg/100g～2.5g/100g蛋白质的含氮量),添加回收率高(>96%)、结果准确,能够准确定量尿素氮与铵态氮总量及分别浓度,既能对人为添加的尿素、硫酸铵等进行测定,也可以检测牛奶中含有的内源尿素氮(MUN)。反应中牛奶样品的前处理采用TCA沉淀法,该过程在脲酶处理之后进行。方法在不同样品、不同测定时间、不同操作人员间的重复性好,乳中可能同时存在的叠氮化钠、碳酸氢钠、硫酸钠、蔗糖、葡萄糖和氯化钠等不会对测定结果产生干扰,超过一定浓度的重铬酸钾(>10mg/mL)、过氧化氢(>0.6%)、硫酸铜(>10mg/mL)、盐酸羟胺(>10mg/mL)、硫脲(>10mg/mL)、亚硝酸盐(>10mg/mL)会对反应产生影响,且均表现为对反应的抑制作用。

全文目录

中文摘要  3-5
Abstract  5-7
目录  7-9
符号说明  9-10
第一章前言  10-34
  1 选题背景  10-12
  2 乳的正常组分及影响乳成分的因素  12-19
    2.1 乳的正常组分  13-17
    2.2 影响乳成分的因素  17-19
  3 原料乳的掺假状况及原因分析  19-22
    3.1 掺假状况  20-21
    3.2 原因分析  21-22
  4 真蛋白和乳尿素氮与铵态氮检测方法研究现状  22-33
    4.1 真蛋白检测方法研究进展  22-27
    4.2 乳尿素氮与铵态氮检测方法研究进展  27-33
  5 本研究的目的与意义  33-34
第二章 Lowry法测定乳真蛋白含量  34-48
  1 材料与方法  34-37
    1.1 标准蛋白溶液  34
    1.2 Lowry反应用试剂  34-35
    1.3 样品  35
    1.4 主要仪器  35
    1.5 反应试剂组成及反应条件的建立  35-36
    1.6 样品前处理方法的建立  36
    1.7 方法的准确性与重复性  36
    1.8 方法的抗干扰能力  36-37
  2 结果与分析  37-45
    2.1 试剂组成与反应条件  37-40
    2.2 样品前处理方法  40-41
    2.3 准确性与重复性  41-43
    2.4 抗干扰能力  43-45
  3 讨论  45-48
第三章酶解-Berthelot法测定乳中尿素与铵态氮  48-72
  1 材料与方法  48-55
    1.1 溶液配制  48-49
    1.2 主要仪器  49-50
    1.3 Bethelot反应的合适测定条件  50
    1.4 脲酶的最适工作条件  50-52
    1.5 牛奶样品前处理方法的建立  52-53
    1.6 方法的准确性  53
    1.7 方法的重复性  53-54
    1.8 方法的抗干扰能力  54
    1.9 反应试剂的保存稳定性  54-55
  2 结果与分析  55-70
    2.1 Berthelot反应的测定条件  55-58
    2.2 脲酶最适工作条件  58-60
    2.3 牛奶样品的前处理  60-61
    2.4 准确性  61-63
    2.5 重复性  63-65
    2.6 抗干扰能力  65-69
    2.7 试剂的保存稳定性  69-70
  3 讨论  70-72
第四章全文讨论与结论  72-76
  1 讨论  72-74
    1.1 乳真蛋白含量的测定  72-73
    1.2 乳中尿素和铵态氮的检测  73-74
  2 结论  74-76
参考文献  76-86
致谢  86-88
攻读学位期间发表的文章目录  88-90

乳真蛋白和尿素与铵态氮检测方法研究

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