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细胞型朊蛋白在不同月龄小鼠视网膜中表达的实验研究

作　者: 刘章
导　师: 周琼
学　校:
专　业: 眼科学
关键词: 细胞型朊蛋白视网膜 ICR小鼠 β-淀粉样蛋白
分类号: R774.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：通过观察细胞型朊蛋白（cellular prion protein, PrP~c）在2周龄，9月龄，18月龄正常ICR小鼠视网膜中的基因表达情况和蛋白表达情况，分析小鼠视网膜中PrP~c的表达与月龄的关系。并观察分析18月龄小鼠视网膜组织与大脑组织PrP~c的表达含量的差异。为后续开展PrP~c与阿尔茨海默病(AD)和视觉病变间的关系提供实验依据。方法：选取2周龄，9月龄，18月龄健康ICR小鼠，每月龄段20只，雌雄各半。充分暴露眼球于眼缘，离断眼球后极部的视神经，利用显微器械轻柔迅速的取出视网膜，将视网膜放入EP管内，于-80°冻存。分别使用逆转录聚合酶链式反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)技术检测各组视网膜组织中PrP~c基因的表达情况；蛋白质印迹法(Western Blot, WB)技术检测各组小鼠视网膜组织中PrP~c蛋白的表达情况。上述两种方法分别检测β-actin表达作为内参因子。分析小鼠视网膜中PrP~c的表达水平与月龄的关系及18月龄小鼠视网膜与大脑组织PrPc的表达含量的差异。结果：1、各月龄段小鼠样本组织中内参因子β-actin的表达较稳定，不随月龄变化而改变，证实本研究所用PCR及Western Blot技术稳定可靠，无明显操作误差；2、2周龄、9月龄、18月龄小鼠视网膜中PrP~c基因表达水平随月龄增大而逐渐增强，各月龄段PrP~c表达水平比较均有显著性差异（P<0.01）；各月龄段小鼠视网膜中PrP~c蛋白表达水平亦随月龄增大而增强，各组比较均有显著性差异（P<0.01）；3、18月龄组小鼠脑组织中PrP~c表达水平高于同组视网膜的表达水平，其差异有统计学意义（P<0.01）。结论：在正常小鼠视网膜中存在PrP~c蛋白基因的表达，且表达水平随着小鼠月龄的增加而逐渐增强，但弱于脑组织中的PrP~c的表达强度。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-8
中英文缩略词表  8-9
第1章前言  9-12
第2章材料与方法  12-19
  2.1 实验材料  12-13
    2.1.1 实验动物  12
    2.1.2 主要试剂  12-13
    2.1.3 主要仪器与设备  13
  2.2 实验方法  13-19
    2.2.1 小鼠组织标本取材  13-14
    2.2.2 RT-PCR 检测小鼠组织表本中 PRP_C 基因的表达  14-16
    2.2.3 WB 检测小鼠组织标本中 PRP_C 蛋白的表达  16-18
    2.2.4 内参因子的设置  18
    2.2.5 统计学处理  18-19
第3章结果  19-24
  3.1 Β-ACTIN  19-20
  3.2 PRP_C（RT-PCR 结果）  20-22
  3.3 PRP_C（WB 结果）  22-24
第4章讨论  24-27
第5章结论  27-28
致谢  28-29
参考文献  29-33
附图  33-37
攻读学位期间的研究成果  37-38
综述  38-45
  参考文献  42-45

细胞型朊蛋白在不同月龄小鼠视网膜中表达的实验研究

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