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pEGFP/Ang-1转染大鼠BMSCs对高糖环境中视网膜血管内皮细胞的保护作用

作　者: 侯阳
导　师: 刘学政
学　校: 辽宁医学院
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 血管生成素-1 骨髓间充质干细胞脉络膜-视网膜内皮细胞
分类号: R774.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的利用重组质粒pEGFP/Ang-1转染大鼠BMSCs细胞株,与RF/6A高浓度葡萄糖培养基中共培养,观察其对RF/6A有保护作用。方法采用贴壁筛选法和密度梯度离心法获取BMSCs,纯化大鼠骨髓间充质干细胞BMSCs后,以重组质粒pEGFP/Ang-1转染,G418筛挑阳性克隆,倒置荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白的表达,检测Ang-1表达量的时间变化；利用Transwell两室模型,将转染的BMSCs与RF/6A于高浓度葡萄糖培养基中共培养,检测RF/6A活力,DNA ladder, pPKB的表达,从而探讨转染BMSCs对高浓度葡萄糖培养中的RF/6A的保护作用。结果成功将血管生成素-1重组质粒(pEGFP/Ang-1)转染大鼠BMSCs细胞株,可稳定表达Ang-13天,7天以后开始减弱。并用Transwell与RF/6A共培养,在3d对下室的RF/6A进行检测。MTT比色法检测细胞存活,在3d检测说明转染组的细胞活力明显好于高糖组和未转染组均有显著性差异,(P<0.01)。DNA琼脂糖电泳显示,转染组细胞未见DNA ladder,其它组均有不同程度DNA ladder的表达；western blot检测磷酸化蛋白激酶B (pro-tein kinase B) PKB的表达,可见PKB的表达升高,说明对细胞有抑制损伤的作用。结论1.高浓度葡萄糖对视网血管内皮细胞具有损伤作用,重组质粒pEGFP/Ang-1转染的BMSCs对高糖环境中视网血管内皮细胞的保护作用。2.转染后的BMSCs可表达Ang-1,增加pPKB磷酸化,进而防止高浓度葡萄糖对RF/6A的损伤。

全文目录

一、摘要  4-8
  中文论著摘要  4-6
  英文论著摘要  6-8
二、英文缩略语  8-9
三、论文  9-29
  前言  9-11
  实验材料与方法  11-18
  实验结果  18-24
  讨论  24-28
  结论  28-29
四、本研究创新性自我评价  29-30
五、参考文献  30-33
六、附录  33-42
  综述  33-40
    参考文献  37-40
  在学期间科研成绩  40-41
  致谢  41-42
  个人简介  42

pEGFP/Ang-1转染大鼠BMSCs对高糖环境中视网膜血管内皮细胞的保护作用

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