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Connexin26基因敲除小鼠模型的建立及慢性噪声暴露的初步研究

作　者: 张蕊
导　师: 刘邦华
学　校: 华中科技大学
专　业: 耳鼻咽喉头颈外科学
关键词: 连接蛋白26 基因敲除小鼠遗传性耳聋基因分型听力损伤
分类号: R764.43
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：为探索GJB2基因突变导致耳聋的机制及防治，我们拟建立Cx26基因敲除小鼠模型。同时初步探索慢性噪声暴露对某一发育阶段敲除Cx26的小鼠内耳的影响。方法：1.（1）条件诱导性Cx26基因敲除小鼠模型的建立：应用PCR技术鉴定两种基因改建的小鼠Cx26^loxP/loxP（C57/BL背景）和ROSA26^Cre-ERT，通过遗传学手段杂交建立Cx26条件诱导性基因敲除小鼠模型。这种小鼠是在Rosa26的基因位点插入了配体依赖Cre重组酶基因，人工合成的雌激素拮抗剂tamoxifen（TMX）能够激活Cre表达。从而切除GJB2基因位点上被loxp序列锚定的片段（2）条件性Cx26基因敲除小鼠模型的建立：使用PCR技术鉴定出Cx26LoxP/LoxP小鼠（CD1背景）与Pax2·Cre小鼠，Cre随Pax2的表达于特定组织中表达，根据遗传学定律两者杂交，F2代获得条件性Cx26基因敲除小鼠（Cx26-/-；Pax2·Cre）。2.慢性噪声暴露： Cx26^loxP/loxP;ROSA26^Cre-ERT小鼠在出生第15天腹腔注射TMX3mg/10g体重，小鼠出生第21天，每日暴露于100dBSPL稳态白噪声，每天8小时，连续暴露5天。听性脑干反应检测小鼠听阈，耳蜗基底膜铺片观察毛细胞情况。结果：基因分型结果显示我们通过遗传学手段将两种基因改建小鼠杂交，获得了Cx26条件诱导性基因敲除小鼠Cx26^loxP/loxP;ROSA26^Cre-ERT和条件性Cx26^loxP/loxP；Pax2·Cre基因敲除小鼠。TMX注射组慢性噪声暴露后底回毛细胞损伤较单纯噪声组严重，差异有显著性。结论：我们在本实验室中建立了两种Cx26基因敲除小鼠模型。1)时间诱导性Cx26基因敲除小鼠模型，该模型可以在耳蜗发育、内淋巴电位产生和听力形成的各个时期敲除Cx26基因。2)条件性Cx26基因敲除小鼠模型，该模型中小鼠耳蜗部分Cx26已被敲除。降低Cx26的表达增加噪声对内耳的损伤。

全文目录

英文缩略词简表  5-6
中文摘要  6-7
Abstract  7-9
第一部分  9-20
  前言  9-12
  材料与方法  12-15
  结果  15-18
  讨论  18-20
第二部分  20-28
  前言  20-21
  材料与方法  21-22
  结果  22-25
  讨论  25-28
参考文献  28-33
综述  33-43
  参考文献  40-43
致谢  43-44

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